上期百螢生物帶您了解了四種市場常見的熒光探針，本期我們將給您介紹其他幾種市場常見的DNA探針，希望對您的實驗有所幫助。

DAPI（4'，6-二脒基-2-苯基吲哚）（Key：藍色熒光、AT序列偏好、熒光顯微鏡、微滲透、細胞毒性、無毒）

DAPI，與此列表中的許多染料一樣，*初合成為醫學劑。它*初用于**錐蟲病，這是一種由寄生蟲引起的**。在20世紀70年代后期，DAPI被用作DNA探針，因為它具有結合DNA的功效和結合后熒光的大量增加。DAPI特別強烈地結合雙鏈DNA的富含AT的區域，并且在結合時將經歷大約20倍的熒光增加。它也可以與RNA結合，但熒光增加較弱，發射紅移。DAPI通常用于熒光顯微鏡。它特別成功地染色死細胞或具有受損膜的細胞。DAPI可以通過完整的細胞膜，但是比較困難。因此，不推薦用于活細胞染色。DAPI的激發波長為358nm，發射波長為461nm。這意味著當使用藍色/青色濾鏡進行可視化時，它將顯示為藍色。它也可以與綠色熒光探針如GFP一起使用。

在實驗中，DAPI具有高細胞毒性，這是不可使用DAPI進行活細胞染色的另一原因。DAPI對人類是無毒的。然而，與許多DNA探針一樣，DAPI可能具有一些誘變特性。該試劑百螢生物有售，見貨號Cat#17509。

7-AAD（7-氨基放線菌素D）（Key:GC序列偏好、紅色熒光、543nm氦 - 氖激光、死細胞、不可滲透、熒光顯微鏡、流式細胞術）

7-AAD是熒光探針和嵌入劑。與DAPI一樣，它對結合雙鏈DNA具有很強的親和力。與富含AT的區域結合的DAPI不同，7-AAD選擇性地結合富含GC的區域。它也會與RNA結合，因此在染色前可能需要消化酶。7-AAD的激發波長為546nm，發射波長為647nm。由于斯托克斯大轉變，許多研究人員使用7-AAD與藍色和綠色熒光探針結合進行多色分析。7-AAD受到543 nm氦氖激光器的激發。

7-AAD適用于檢測死細胞群或具有受損膜的細胞。它不容易通過完整的膜，是它不能成為活細胞染料的重要原因。7-AAD已在熒光顯微鏡和流式細胞術中得到廣泛應用。該試劑百螢生物有售，見貨號Cat#17501。

Hoechst 33258（33342,34580）（Key:藍色熒光、活細胞、膜可滲透、低細胞毒性、AT序列偏好、氙汞燈、紫外激光、熒光顯微鏡、流式細胞儀）

Hoechst染色是一組藍色熒光DNA探針。早在20世紀70年代，它們就被用于染色DNA。這些染料由德國公司Hoechst AG開發，是傳統藍色熒光染料的良好替代品。Hoechst染料比類似染料如DAPI具有更高的細胞滲透性。這意味著Hoechst染色劑，如Hoechst 33258，適用于染色活細胞和死細胞。此外，由于Hoechst染料的細胞毒性較低，對活細胞群的影響大大降低。Hoechst染色將選擇性地結合富含AT的雙鏈DNA區域，特別是與小溝結合。在與DNA結合后，Hoechst染色將經歷大約30倍的熒光增加。Hoechst染色可以被紫外線（~360nm）激發并發出藍色熒光（~460nm）。這些染料與氙汞燈以及紫外激光器兼容。它們非常適用于熒光顯微鏡，**組織化學和流式細胞術。

Hoechst 33258,33342和34580之間的區別很重要。與Hoechst 33258相比，Hoechst 33342由于添加了親脂性乙基而具有顯著更高的滲透性。對于Hoechst 34580，發射*大值略微藍移，與Hoechst 33258和Hoechst 33342的461 nm發射*大值相比，駐留在437 nm處。該試劑百螢生物有售，見貨號Cat#17523。

PicoGreen®/ Helixyte?（Key:高成本，極其敏感，綠色熒光，PCR，酶標儀，dsDNA）

PicoGreen（及其化學等效的Helixyte）是一種極其敏感的雙鏈DNA探針。它可用于生物化學應用，例如酶標儀中dsDNA的定量。它可以檢測低至25 ng / mL的dsDNA。這使得它比Hoechst探針更敏感。除了靈敏度之外，PicoGreen還是一種非常有選擇性的探針。它對單鏈DNA，RNA和游離核苷酸的dsDNA具有高親和力。

顧名思義，PicoGreen在與DNA結合時會發出綠色熒光。它的熒光也會增加大約1000倍。這意味著它將具有非常好的信噪比。它可用于各種應用，例如PCR和微陣列分析。它是DAPI和Hoechst的良好替代品。特別是，當DNA樣品數量有限時，由于其對傳統污漬的敏感性和選擇性更高，因此非常適用。然而，這些優勢是有代價的。探針本身比傳統探針更昂貴，每毫升花費幾百美元。該試劑百螢生物有售，見貨號Cat#17597。

YOYO®-1 / DiYO?-1 /TOTO®-1 / DiTO?-1（Key:極其敏感、高成本、不滲透、流式細胞儀、細胞活力、花菁、綠色熒光）

這些是基于化合物惡唑黃的菁染料家族。盡管如此，這些染料實際上發出的是綠色熒光而不是黃色熒光。例如，YOYO-1（及其化學當量，DiYO-1）的*大發射為509nm。TOTO-1（及其化學當量，DiTO-1）也是如此; 該化合物的*大發射為535nm。這些化合物是嵌入劑，意味著它們將自身插入DNA堿基對的平面表面之間。該DNA探針家族因其對DNA的高親和力而被人們所知曉。在與DNA結合后，這些探針可以經歷熒光增加一千至三千倍。這種對DNA的強烈親和力使它們非常適合需要極高靈敏度的實驗。然而，這些探針相當昂貴。一毫升可能花費幾千美元。

因為這些探針是細胞不可滲透的，所以它們不能通過完整的細胞膜。它們非常適合染色固定或死細胞。在這方面，這些探針通常與諸如流式細胞術的平臺一起用于細胞活力和細胞毒性測定。該試劑百螢生物有售，見貨號Cat#17580。

SYBR®（Key:綠色熒光，qPCR，凝膠電泳，高成本，花青）

SYBR是另一類基于花青的染料，用于染色DNA和RNA。該染料家族對雙鏈DNA具有高選擇性，對單鏈DNA和RNA的選擇性較低。SYBR染料主要是綠色熒光探針（SYBR Green I和SYBR Green II），也可選擇黃色熒光（SYBR Gold）。

SYBR染料已被發現用于量化DNA。例如，SYBR染料可用于監測定量實時PRC（qPCR）。SYBR染料也已用于凝膠電泳。特別是，SYBR染料作為常用的溴化乙錠的更**的替代品已被出售。然而，關于SYBR染料是否確實比溴化乙錠更不危險的證據是混合的，因為它們都是潛在的誘變劑，源于它們插入DNA的能力。在定價方面，SYBR染料比溴化乙錠貴得多，每毫升約500美元。該試劑百螢生物有它的同等替代品，見貨號Cat#17592。

百螢生物，是美國AAT Bioquest 的中國代理商，原裝進口的產品，給您*佳的科研體驗。以上是本期介紹的所有DNA探針，希望大家根據自己的實際情況選擇適合自己試驗的試劑，達到上乘的實驗效果。