脫氧核糖核酸(或DNA)是生物學中*重要的大分子之一。它可作為蛋白質合成等關鍵細胞過程的指導,是大量細胞結構的藍圖。由于DNA的重要性,已經開發了許多可視化和量化工具。已經創建了用于檢測各種應用中的DNA的試劑和探針 - 顯微鏡,凝膠電泳和流式細胞術等等。市場上有超過50種不同的染料,確定任何給定實驗的*佳染料可能有點壓倒性。為了簡化這個過程,我們認為這是10種*佳DNA染料。
溴化乙錠(Key:價格便宜、技術成熟、橙色熒光、熒光顯微鏡、凝膠電泳)
溴化乙錠(EtBr)是*受歡迎的DNA探針之一。這是因為它是**批商業化的產品之一。早在20世紀50年代,它就被用來**牲畜**。在20世紀70年代,科學家開始將其用作DNA探針。除了早期采用,溴化乙錠相對便宜。即使是大批量生產,它仍然非常實惠,每克約30美元。
溴化乙錠非常適合在瓊脂糖凝膠電泳中染色DNA。它還可用于檢測PCR中的dsDNA。與DNA結合后,EtBr的亮度增加約20倍。當被UV光(~300nm)激發時,它釋放橙色熒光(605nm)。溴化乙錠也可以根據RNA折疊發生的程度來檢測RNA。然而,溴化乙錠不是檢測活細胞中DNA的良好探針。這是因為它對完整的細胞膜是不可滲透的。
多年來,人們對溴化乙錠的使用產生了健康問題。特別是,人們對溴化乙錠作為誘變劑的作用提出了擔憂。當大量暴露時,溴化乙錠會干擾人體中的DNA復制和轉錄。這是由于其作為嵌入劑的特性。然而,在低濃度下,它不被視為危險廢物。這引發了關于溴化乙錠是否適合傳統實驗室使用的激烈爭論。
碘化丙啶(Key:流式細胞儀、多路復用、紅色熒光、死細胞、不滲透、488nm)
碘化丙啶是DNA探針和嵌入劑。它與溴化乙錠屬于同一化學家族。與溴化乙錠一樣,碘化丙錠具有形成其核心的含氮環結構。它的不同之處在于它具有另外的季胺,其與碘離子離子結合。與DNA結合后,碘化丙錠的熒光增加20-30倍。如果發生折疊,它也可以與RNA結合。碘化丙錠是膜不可滲透的。它只能進入膜受損的細胞。這使其成為識別死細胞的優良探針。它還可用于定量評估生物樣品中的DNA含量。
碘化丙啶沒有序列偏好,每4-5堿基對大約結合一次。它可以通過氙燈或汞燈以及488 nm氬離子激光器激發。由于其在617nm處的發射,它可以容易地用于多重測定。它可以與綠色熒光探針如熒光素結合使用。它也可以用作多色分析的復染劑。
就價格而言,它比溴化乙錠(每克約1000美元)貴得多。然而,它是用于流式細胞術的非常常見的染料。它還可用于熒光顯微鏡和熒光光譜。本產品,百螢有售,見貨號Cat#17515。
結晶紫(Key:凝膠電泳、無熒光、靈敏度差、價格便宜、無毒)
結晶紫是一種簡單的化合物,由三個結合苯環組成,附著在三個胺上。它長期以來一直用于各種醫學目的,既可作為**劑又可作為局部防腐劑。它也具有作為組織學染色劑的長期使用歷史,其早期用途可追溯到1800年代后期。結晶紫可能因其在革蘭氏染色中的應用而廣為人知,以確定**是革蘭氏陽性還是革蘭氏陰性。作為DNA探針,結晶紫可用于凝膠電泳中的核酸檢測。在這些應用中,它可用作熒光探針(如溴化乙錠)的替代品。這是一個特別有力的優點,因為使用紫外光源激發熒光探針可能導致DNA降解。然而,對這種結晶紫的應用的權衡是靈敏度的損失。在實驗中,結晶紫被證明對DNA的敏感性低于熒光探針如溴化乙錠。盡管溴化乙錠可以在凝膠帶中檢測到1 ng的DNA,但結晶紫的靈敏度約為16 ng。如果使用復染劑如甲基橙,則該靈敏度可提高至8 ng。但是,它仍然不如溴化乙錠敏感。
在定價方面,水晶紫是非常實惠的。它也是相當無毒的。如果健康問題是一個問題,結晶紫可以作為一些更危險的化合物,如溴化乙錠的無毒替代品。
dUTP-綴合探針(Key:多功能,直接標記,雜交,PCR,FISH,DIG-dUTP)
dUTP-綴合探針是一類靈敏的DNA檢測探針,主要是由于它們提供的實驗靈活性?;舅枷胧鞘褂盟^的鏈接器將探針附加到dUTP。然后,通過分子技術將dUTP摻入DNA中。這也將探針結合到DNA大分子中。以這種方式,DNA被探針標記。因為dUTP可以與許多不同的探針綴合,所以dUTP-綴合物具有廣泛的潛在應用。例如,dUTP探針可用于監測PCR反應。它們也可以用作FISH程序中的探針。通常,dUTP探針在發生DNA雜交的情況下表現優異。
一些*常見的dUTP綴合物包括用洋地黃毒苷(DIG),生物素和熒光素等化合物標記。用這些化合物標記都提供用于DNA檢測的非放射性探針。特別是這些探針也在**測定如ELISA中得到廣泛應用。該產品百螢生物有售,見貨號Cat#17011。