熒光共振能量轉移 (FRET) 是兩個發色團(供體分子和受體分子)之間依賴于距離的能量轉移。當靠近時,電子激發的供體生色團可以通過分子內長程偶極-偶極耦合相互作用以非輻射方式將能量轉移到受體生色團。因此,能量的轉移淬滅了供體的熒光強度并減少了其激發態壽命,同時增加了受體生色團的排放系數。由于 FRET 的效率取決于分子間分離的反六次方,因此它是一種有利的技術,可用于研究產生分子接近度變化的各種生物現象,包括受體-配體相互作用、空間分布、蛋白質復合物的組裝以及膜電位傳感。
AAT Bioquest 提供多種熒光供體和受體對以及非熒光Tide Quencher?和BXQ 染料,用于工程基于 FRET 的生物傳感器,以及用于研究冠狀病毒蛋白酶活性和免洗、時間分辨 FRET 測定的 FRET 肽。監測 G 蛋白偶聯受體系統中腺苷酸環化酶的激活。
FRET 的三個主要條件
雖然許多因素會影響 FRET 效率,但 FRET 發生必須滿足以下三個主要條件:
1.供體分子和受體分子必須彼此非常接近,通常為 10-100 ? (1-10 nm)。FRET 效率 (E) 由方程 E = R0?/(R0? + r?) 定義,其中 R0是F?rster半徑,r 是供體分子和受體分子之間的實際距離。F?rster半徑是50%的激發能從供體轉移到受體的距離,R0值通常在10-100 ?之間。由于FRET發生的可能性增加,在這個范圍的較好具有R0值的FRET。
2.受體的吸收或激發光譜必須與供體的熒光發射光譜重疊(圖1)。它們重疊的程度稱為光譜重疊積分(Jλ,灰色陰影區域)。Jλ 的程度越大,發生 FRET 的可能性就越大。
3.供體和受體躍遷偶極子方向必須近似平行。
FRET光譜重疊積分的示意圖(以灰色陰影顯示)