基本信息

貨號：22022 (25 mg) 22028 (5 x 0.5 mg)

儲存方式：-20℃避光

保質期：自收到起12個月

簡介

眾所周知，細胞的熒光標記是檢測樣品中存活細胞的有效方法。流式細胞儀結合熒光染色是分析異質細胞群的有力工具。在所有現有的熒光染料中，熒光素二乙酸酯（FDA）及其衍生物（例如CFSE）是非熒光分子，其擴散到細胞中并被細胞內非特異性酯酶水解以產生熒光產物。熒光產物僅在具有完整細胞膜和活性酯酶活性的細胞中產生和積累，而死細胞不被染色。 FDA及其類似物（如CFSE）的膜轉運和細胞內水解的**動力學與細胞功能有關。對于多重轉染GFP的細胞或使用FITC標記的抗體，我們提供功能類似于CFSE的CytoTell?染料，可用于使用GFP或FITC標記抗體的多色應用，因為這些染料具有激發或發射光譜不同于CFSE及其熒光素類似物。此外，我們的CytoTell?染料不僅消除了與CFSE相關的染料外排缺陷，而且在成像或流式細胞分析之前與染色細胞中的細胞培養基相容。

儲存和處理條件

如果儲存在-20°C，CFSE應保持穩定至少12個月，避免光照和潮濕，避免凍/融循環。

物理化學特性

分子量：557.46

溶劑：二甲基亞砜（DMSO）

光譜性質：Ex / Em = 494 / 521nm

分析方案

簡要總結

使用測試化合物制備細胞®

添加0.5至5μMCFSE工作溶液®

在室溫或37 oC下將染料與細胞一起孵育10至30分鐘®

移除染料工作溶液®

使用Ex / Em = 490/520 nm的流式細胞儀進行分析 （FL1）

注意：以下是我們推薦的活細胞方案。 它只提供指導，應根據您的具體需求進行修改。

1.準備10 mM DMSO儲備溶液

對于＃22022：將5.6mg溶于1ml DMSO中以制備10mM儲備溶液（1mg / ml相當于1.8mM）;對于＃22028，向每個小瓶中加入90μLDMSO以制備10mM儲備溶液。

注意：應及時使用原液; 任何剩余的溶液應等分并在<-20℃冷凍。 避免反復凍融循環，避免光照。

2.準備CFSE工作解決方案

在使用前準備CFSE工作溶液（0.5至5μM），用Hanks和20 mM Hepes緩沖液（HHBS）或您選擇的緩沖液（pH 7）稀釋步驟1中的DMSO儲備液（20,000至2,000次），并將它們混合。

3.用流式細胞儀或熒光顯微鏡分析細胞：

3.1用測試化合物處理細胞一段所需的時間。

3.2離心細胞，每管取1-5×10⁵個細胞。

3.3將細胞重懸于500μL染料工作溶液中（來自步驟2）。

3.4在室溫或37°C下用染料溶液孵育細胞10到30分鐘，避光。

3.5從細胞中取出染料工作溶液，用HHBS或您選擇的緩沖液洗滌細胞。將細胞重懸于500μL預熱的HHBS或培養基中，每管加入1-5×10⁵個細胞。

3.6使用流式細胞儀（FL1通道）或熒光顯微鏡監測Ex / Em = 490 / 520nm處的熒光變化。