基本信息

貨號：21202（1 mg）

儲存條件：-20℃避光

簡介

細胞內pH在許多細胞事件中起著重要的調節作用，包括細胞生長，鈣調節，酶活性，受體介導的信號轉導，離子轉運，內吞作用，趨化性，細胞粘附和其他細胞。近年來，pH敏感性熒光染料已被廣泛應用于監測細胞內pH的變化。使用熒光pH指示劑的成像技術還允許研究人員使用其他技術（如微電極）實現更大的空間分辨率和采樣密度來研究這些過程。其中，2'，7'-雙 - （2-羧乙基）-5-（和-6） - 羧基熒光素（BCECF）是常用的pH探針，因為它可用于比率監測細胞pH。 BCECF AM是BCECF的細胞滲透型。 AAT Bioquest開發了一種更好的版本，單一異構體化合物BCFL，AM使得pH測量比BCECF，AM更加可重復，它由相當多的不同異構體組成。

物理化學特性

分子量：~808.69

溶劑：二甲基亞砜（DMSO）

光譜特性：Ex / Em = 503 / 528nm

標準細胞的測定方案

在生長培養基中制備細胞®

添加等體積的BCECF，AM染料上樣溶液（100μL/孔用于96孔板）在37℃下孵育1小時®

洗滌并用HHBS替換®

讀取熒光，在Ex / Em = 490 / 535 nm，加入50μL/孔化合物（或505/535和430/535 nm比例）

注意：以下是標準單元負載的推薦步驟。 該步驟僅提供指導，應根據具體需要進行修改。

1.根據需要準備細胞。 例如，將粘附細胞在生長培養基中以40,000至80,000個細胞/孔/100μL過夜，96孔或10,000至20,000個細胞/孔/25μL，用于384孔板。

注意：應對每個細胞系進行單獨評估，以確定細胞密度。

2.準備BCECF，AM染料加載溶液：

2.1在高質量無水DMSO中制備2至20 mM BCECF，AM原液。 應立即使用原液。 任何未使用的溶液需要等分并在<-20 oC重新冷凍。

注意：避免反復凍融循環，避免光照。

2.2在Hanks和20 mM Hepes緩沖液（HHBS）中制備5-50 uM BCECF，AM染料加載溶液

3.運行pH分析

3.1將100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）BCECF，AM染料加載溶液加入細胞板（來自步驟2.3）。

注意：如果您的化合物干擾血清，重要的是用HHBS緩沖液替換生長培養基（96孔板100μL/孔或染料加載前384孔板25μL/孔）。

3.2將染料加載板在細胞培養箱中孵育30至60分鐘。

3.3用HHBS洗滌并更換染料加載溶液。

3.4使用HHBS或所需的緩沖液制備復合板。

3.5通過監測Ex / Em = 490 / 535nm（在515nm處截止）或505 / 535nm和430 / 535nm（在515nm處截止）處的熒光進行pH測定以進行比率測量。 添加化合物為50μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）。

注意：化合物應在化合物添加后3至5分鐘內完成，但在測定開發過程中建議至少8分鐘的數據收集。