1.什么是螢光素/螢光素酶反應?它如何起作用？
在自然界中，當化學能轉化為光能時，就會發生生物發光。螢火蟲，**和海洋生物等許多生物都出于多種原因出現生物發光。當螢光素酶催化螢光素的氧化導致發光時，就會發生該過程。反應機理如下圖所示：
2.螢光素酶檢測的主要目的是什么？
螢光素酶是檢測啟動子強度和活性的好方法。例如，如果您想研究啟動子區域內的轉錄，可以將熒光素酶基因置于啟動子后面。轉錄該基因后，您將根據產生的熒光強度知道自己是否具有強大的啟動子。檢測中產生更強的熒光意味著更多的熒光素酶被轉錄，這意味著您具有更強的啟動子。 您也可能會遇到的另一個問題是，如果要檢測基因表達，何時選擇熒光素酶測定法，何時選擇qPCR。要記住的是：qPCR方法將測量基因的轉錄本。它不會告訴您轉錄的控制。但是，使用螢光素酶可以測量啟動子的和轉錄調控。還要考慮的另一件事是，您想要研究基因調控的深度。您可能會發現，必須同時執行這兩種技術才能了解項目的主要方面。
3.我需要什么進行熒光素酶檢測？
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領域
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研究類型
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試劑
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儀器
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孔板/管
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生物光學成像
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細胞、活體動物（如：小鼠）
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熒光素酶檢測試劑/熒光素酶檢測試劑盒
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酶標儀/單管發光儀
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微孔板/微量離心管
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注：
1.試劑：您可以選擇一個試劑盒來進行實驗，它會包含您需要的所有必要成分；您也可以選擇試劑，再配制或購買其他實驗中的必要成分。如果您購買的是單獨的產品，那么我們建議您考慮質量，尤其是在熒光素方面。純度的差異會產生影響。而試劑盒具有相當大的便利性，例如，您不必制作緩沖液，因為試劑盒中已經提供了它。制備螢光素儲液時，無需稱量，因為您的螢光素已經過測量。它還在您的實驗設置中提供了統一性。
2.儀器：首先檢查您的儀器是酶標儀還是單管發光儀，找出您的儀器是否帶有進樣器。并找出您的儀器在什么波長下工作以及在什么溫度下工作。所有這些都將幫助您進一步規劃實驗。（酶標儀允許您讀取孔板中的樣品。通常范圍在96到384之間；單管發光儀，將讀取單個微量離心管。）
3.孔板/管：對于這種測定類型，必須使用平坦的底板（不要使用圓底的孔板）。它們是專門為光學檢查和細胞培養應用而設計的。透明的孔板使您可以看到裂解物，但缺點是相鄰的孔中的背景可能會影響您的觀察。白色的孔板可以防止出現這種背景。但是，您看不到自己的裂解物。底部透明的白板可以解決可見性和背景問題，但價格昂貴。如何選擇，取決于您的實驗需求及資金。
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4.螢光素酶檢查的基本步驟是什么？
熒光素酶檢查的步驟非常相似，您是進行雙重報告基因分析還是單個報告基因?；静襟E如下：
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a. 選擇熒光素酶報道基因（螢火蟲熒光素酶或海腎熒光素酶等）。如果要進行雙重報告基因檢測，則螢光素酶需要進行不同的光譜檢查。
b. 將報告基因克隆到質粒中。如果您要進行雙重報告基因檢測，則將其他報告基因克隆到單獨的質粒中。
c. 將質粒與實驗細胞共轉染。
d. 經過24至48小時培養后，取出培養基并裂解細胞。
e. 將包含螢光素的緩沖液添加到裂解物中，使用酶標儀進行檢測。
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這些是您可以遵循的一般步驟。實際情況應根據您要執行的分析類型和實驗目標，調整實驗方法。
相關試劑
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分類
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品名
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貨號
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Ex/Em（nm）
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試劑
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熒光素酶*重組熒光素*
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#12500
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D-熒光素游離酸
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#12501/#12502/#12503
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328/533
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D-熒光素鉀鹽
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#12505/#12506/#12507
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328/533
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D-熒光素鈉鹽
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#12509/#12510/#12511
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328/533
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D-熒光素磷酸鹽
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#12512
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328/533
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D-熒光素半乳糖苷
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#12513
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328/533
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D-熒光素甲酯
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#12514
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328/533
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D-熒光素乙酯
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#12515
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328/533
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D-熒光素醋酸
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#12516
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328/533
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試劑盒
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Amplite 熒光素酶報告基因檢測試劑盒
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#12518/#12519/#12520
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/
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Amplite 高斯熒光素酶報告基因檢測試劑盒
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#12530/#12531/#12532
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429/466
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Amplite 海腎熒光素酶報告基因檢測試劑盒
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#12535/#12536/#12537
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429/466
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