9.問：Cy3酰肼可以用于哪些應用領域？

答：Cyanine 3 酰肼（貨號146） 可以與含有醛基或酮基的分子反應，形成穩定的酰肼鍵。這種染料可以用于標記經過過氧化物酶氧化后的抗體和其他糖蛋白，或者標記受到氧化應激或脫氨作用的蛋白質，或者標記還原性的糖類。Cy3 NHS酯（貨號141）可以與含有氨基的分子反應，形成穩定的酰胺鍵。這種染料可以用于標記多肽、蛋白質和寡核苷酸中的氨基末端或伯胺。如果需要該類產品進行蛋白/抗體染色，請根據目標的反應基團和功能基團，按

需選擇。

10.問：Cy3NHS酯標記蛋白或抗體后，如何高效純化？

答：（1）（實驗常用）用凝膠過濾層析法：將標記反應液通過大小孔徑合適的凝膠過濾柱，用適當的緩沖液洗脫，收集流出液中的Cy3-蛋白標記物，并測定蛋白濃度和熒光強度。這種方法簡單快速，但可能會造成一些蛋白損失或稀釋。

（2）用逆相高效液相色譜法（RP-HPLC）：將標記反應液通過逆相C18柱，用不同比例的水和有機溶劑（如乙腈或甲醇）作為流動相進行梯度洗脫，收集適當的色帶峰，冷凍干燥后得到Cy3-蛋白標記物。這種方法可以有效地分離和純化Cy3-蛋白標記物，但需要專業的儀器和操作技術。

（3）用親和層析法：如果待標記的蛋白具有特定的親和性，可以利用親和層析法進行純化。例如，如果待標記的蛋白是抗體，可以用蛋白A或蛋白G柱進行純化；如果待標記的蛋白是GST融合蛋白，可以用谷胱甘肽柱進行純化。這種方法可以保留蛋白的活性和穩定性，但需要特定的親和配體和緩沖液。

11.問：Cy3鏈霉親和素和Cy3NHS酯在蛋白的標記方面有何區別？

答：Cy3鏈霉親和素（貨號16912）是一種將Cy3熒光染料與鏈霉親和素（streptavidin）結合的偶聯物，可以用于檢測生物素化的生物分子，例如抗體、配體或DNA探針。

它可以用于間接標記法，即先用生物素化的**抗體或其他生物素化的探針與目標蛋白結合，然后用Cy3鏈霉親和素與生物素結合，產生熒光信號。

Cy3鏈霉親和素的操作方法取決于所使用的生物素化探針的類型和濃度，一般來說，需要先將樣品與生物素化探針孵育，然后用PBS或其他適當的緩沖液洗滌去除多余的探針，再加入適量的Cy3鏈霉親和素孵育，*后再次洗滌去除多余的偶聯物，就可以進行熒光檢測了。

12.問：Cy3疊氮化物和炔烴有什么關系？這兩個產品如何標記蛋白？

答：Cy3炔烴（貨號144）和疊氮化物（貨號143）可以在銅催化下發生[3+2]環加成反應，生成1,4-二取代的1,2,3-三唑衍生物，這種衍生物是Cy3染料的一種形式。

這種反應屬于點擊化學的范疇，因為它是高效、選擇性和正交的，即它不會受到其他官能團的干擾，也不會產生副產物。

Cy3炔烴和疊氮化物可以用來標記蛋白的方法是，將含有Cy3炔烴的蛋白和含有疊氮化物的標記分子（如抗體或其他配體）在銅催化下發生點擊化學反應，形成穩定的三唑連接，從而實現蛋白的熒光標記。

這種方法的優點是，它可以在溫和的條件下進行，不會破壞蛋白的結構和功能，而且反應選擇性高，不會受到其他官能團的干擾。 另外，Cy3染料是一種亮度高，熒光穩定，對pH不敏感的橘黃色熒光染料，它可以用532 nm激光線激發，并用TRITC濾光片組觀察。

13.問：Cy3 TCO是什么？它與Cy3 NHS相比有什么區別？

答：Cy3反式環辛烯 [Cy3 TCO]（貨號900）是一種熒光染料，可以與四唑類化合物發生快速的點擊反應，形成穩定的共軛物。Cy3 TCO的優點是反應速度快，無毒，適用于多種生物體系。缺點是染料分子較大，可能影響標記分子的活性或穩定性。

Cy3反式環辛烯 [Cy3 TCO]和Cy3 NHS酯 [Cy3 NHS]是兩種不同的熒光染料，它們都可以用于標記含有氨基的生物分子，但是它們的反應機制和條件有所不同。Cy3 TCO是一種點擊化學試劑，它可以與四唑類化合物發生快速的無副產物的環加成反應。這種反應可以在水相或有機相中進行，不受pH、溫度、緩沖液等因素的影響。Cy3 NHS酯是一種活化酯試劑，它可以與氨基形成酰胺鍵3。這種反應需要在pH 7-9的緩沖液中進行，且受到水解、氨基競爭等因素的影響。因此，Cy3 TCO比Cy3 NHS酯具有更高的反應效率和選擇性，更適合標記活性或穩定性較低的生物分子。所以如果需要標記含氨基的生物分子，選擇不止Cy3NHS酯，Cy3 TCO也許是您實驗的更優良選擇，考慮自己的實驗條件，選擇*佳產品，可以事半功倍。

14問：Cy3四嗪是什么？它與其他常見的Cy3染料有何不同？

答：Cy3 tetrazine（貨號910）和其他Cy3染料的主要區別在于它們的反應基團和反應方式。Cy3 tetrazine是一種帶有四唑基團的熒光探針，它可以與TCO（反式-環辛烯）或其他應力烯烴發生特異性的點擊化學反應，形成穩定的生物結合物。這種反應具有快速、高效、無毒和無銅的優點。

15.問：PE-Cy5 Tandem和普通的Cy5染料相比，有什么優勢？

答：（1）PE-Cy5 Tandem（貨號2610）與FITC、PE在光譜上重疊范圍小，熒光干擾少，因此實驗中常將PE-Cy5 Tandem與FITC、PE搭配使用。普通的Cy5染料與單核細胞和粒細胞的非特異性結合多，實驗結果容易出現假陽性。

（2）PE-Cy5 Tandem具有較高的熒光強度和穩定性，可用于標記表達水平較低的蛋白。普通的Cy5染料的熒光強度和穩定性較低，適用于標記表達水平較高的蛋白。

（3）二者的染色步驟類似，主要根據蛋白的表達水平選擇適合自己實驗的產品。

16問：Cy5DIGE NHS酯是什么？它和Cy5NHS酯有什么區別？

答：Cy5DIGE NHS ester（貨號25306）是一種專門用于差異凝膠電泳（DIGE）分析的染料，它可以與C2DIGE和/或C3DIGE一起使用，來比較兩個或三個樣品中的蛋白質表達。Cy5DIGE NHS ester具有**的遷移匹配和高分辨率的蛋白質檢測能力。Cy5NHS則是一種更通用的染料，它可以用于標記核酸分子（DNA和RNA）以及其他生物分子。