Tide Fluor和Tide Quencher染料選擇指南
今天百螢總結了AAT Bioquest研發的Tide Fluor和Tide Quencher兩類染料的特點、使用方法等,希望可以為還不知道如何選擇這兩類產品的小伙伴一些幫助。
什么是Tide Fluor、Tide Quencher染料?
Tide Fluor和Tide Quencher是一類磷酰胺染料和CPG載體,用于制備FRET寡核苷酸,它們是經典染料(如FAM、HEX、TET和JOE)和上等低聚標記染料的**替代品。AAT Bioquest的Tide Fluor 染料(如TF1,TF2,TF3,TF4,TF5,TF6,TF7和TF8)具有比典型的熒光團(如熒光素,羅丹明和花青素)更強的熒光性和更高的光穩定性。我們的TF2的激發和發射波長與羧基熒光素(FAM)的激發波長和發射波長基本相同,這使其易于用于熒光素的生物學應用,但TF2具有更強的性能。與FAM探針相比,TF2在生理條件下具有更強的熒光,并且光穩定性更高。相比熒光素和Cy染料(如AlexaFluor® 和Cy3,Cy5和Cy7),Tide Fluor 染料具有更高的成本效益。
圖1.雜交誘導的分子信標寡核苷酸探針的熒光增強對比,該探針包含Tide Fluor 染料作為供體或Tide Quencher 染料作為受體。
除了杰出的Tide Fluor 供體染料外,Tide Quencher FRET受體染料(例如TQ1,TQ2,TQ3,TQ4,TQ5,TQ6和TQ7)經過優化,可與我們的Tide Fluor 染料和經典的熒光團(例如AMCA,EDANS,FAM,TAMRA,HEX,JOE,TET,ROX,Cy3,Cy5和Cy7)配對。與我們的Tide Fluor 供體染料一樣,我們的Tide Quencher 受體染料與市場上其他同類產品相比,也具有更高的成本效益,可滿足您所需的生物學應用。
為了方便研究,Tide Fluor 染料和Tide Quencher 染料擁有多種反應形式。對于寡核苷酸的合成標記,我們同時提供了Tide Fluor 和Tide Quencher 染料的亞磷酰胺及其CPG載體。對于寡核苷酸的后標記,我們提供氨基反應性和巰基反應性的Tide Fluor 和Tide Quencher 水溶性染料。
Tide Fluor與Tide Quencher特點
Tide Fluor染料
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Tide Quencher染料
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經過優化,可與Tide Quencher 受體配對使用,以*大程度提高FRET電位
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較強的熒光強度可以增強檢測靈敏度
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對pH不敏感和對環境不敏感的熒光,使檢測更加方便簡單
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更高的光穩定性,可提高熒光成像的質量
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多種反應形式可用于綴合物
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功能強大:能夠探索其他淬滅劑可能無法達到的FRET電位。
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多種反應形式:方便自我構建所需的FRET生物分子
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匹配度高:與您所需的熒光供體完全匹配。
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性價比高:具有*佳的性能與便宜的價格。
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Tide Fluor與Tide Quencher系列產品選擇指南
表1.Tide Fluor系列產品選擇指南
Tide Fluor 染料
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Ex(nm)
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Em(nm)
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主要應用功能*
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Tide Fluor 1(TF1)
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341
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447
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TF1被設計為EDANS熒光團的優良替代品,具有以下特征:
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Tide Fluor 2(TF2)
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499
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522
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TF2被設計為熒光素(FAM和FITC)的優良替代品,具有以下特征:
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在pH7時熒光強度更強
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對pH敏感的熒光更少
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光穩定性更高
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Tide Fluor 3(TF3)
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560
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580
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TF3被設計為Cy3熒光團的優良替代品,具有以下特征:
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Tide Fluor 4(TF4)
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588
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610
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TF4被設計為ROX和Texas Red熒光團的優良替代品,其具有以下特征:
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Tide Fluor 5(TF5)
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649
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664
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TF5被設計為Cy5熒光團的優良替代品,具有以下功能:
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Tide Fluor 6(TF6)
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676
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695
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TF6被設計為Cy5.5熒光團的優良替代品,具有以下功能:
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Tide Fluor 7 (TF7)
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749
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775
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TF7被設計為Cy7熒光團的優良替代品,具有以下功能:
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Tide Fluor 8 (TF8)
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775
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807
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TF8是AAT Bioquest目前提供的*長波長的Tide Fluor 染料。其綴合物可用于基于NIR熒光探針的體內成像分析。
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表2.Tide Quencher系列產品選擇指南
Tide Quencher染料
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吸收(nm)
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主要應用功能*
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Tide Quencher 1(TQ1)
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?490
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TQ1被設計為DABCYL優良淬滅劑的替代品,具有以下特征:
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吸收更強
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更高的淬滅效率
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具有所需溶解度的多功能反應形式
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Tide Quencher 2(TQ2)
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~520
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TQ2被設計為FAM,HEX,TET,JOE,TF2和羅丹明6G的優良淬滅劑,具有以下特征:
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吸收更強
-
更高的淬滅效率
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具有所需溶解度的多種反應形式
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Tide Quencher 3 (TQ3)
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~570
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TQ3被設計為TAMRA,TF3和Cy3的優良淬滅劑,具有以下特征:
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吸收更強
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更高的淬火效率
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具有所需溶解度的多種反應形式
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Tide Quencher 4 (TQ4)
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?600
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TQ4被設計為ROX、TF和Texas Red的優良淬滅劑,具有以下特點:
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吸收更強
-
更高的淬滅效率
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具有所需溶解度的多種反應形式
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Tide Quencher 5(TQ5)
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~660
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TQ5被設計為Cy5和TF5的優良淬滅劑,具有以下特征:
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吸收更強
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更高的淬火效率
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具有所需溶解度的多種反應形式
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Tide Quencher 6 (TQ6)
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~700
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TQ6被設計為Cy5.5和TF6的優良淬滅劑,具有以下功能:
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吸收更強
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更高的淬滅效率
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具有所需溶解度的多種反應形式
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Tide Quencher 7(TQ7)
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~760
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TQ7被設計為Cy7和TF7的優良淬滅劑,具有以下功能:
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吸收更強
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更高的淬火效率
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具有所需溶解度的多種反應形式
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選擇FRET的供體和受體
供體分子和受體分子的選擇可以相同,也可以不同。在大多數應用中,它們是不同的染料。FRET既可以通過受體敏化熒光的出現,也可以通過供體/受體的強度比變化(如果受體是熒光的)或供體熒光強度的降低來檢測。在后一種情況下,受體可以是熒光的或非熒光的。各種D/A對的Ro值可以明確的看出FRET的效率,FRET對的Ro值越大,FRET效率越高。熒光素/四甲基羅丹明對已被廣泛地用于開發FRET的分析。EDANS/DABCYL對已被廣泛用于開發FRET的核酸探針和蛋白酶底物。MCA(7-甲氧基香豆素-4-乙酸)和DNP(2,4-二硝基苯胺)是開發熒光探針的另一對供體/受體。與EDANS/DABCYL對相比,MCA/DNP對的熒光信號波長通常較短且較弱。然而,由于波長較小,MCA/DNP對往往表現出更好的親和力。DNP也是一種很好的FRET受體,與色氨酸(Trp)、2-氨基苯甲酸(Abz)或Abz衍生物(如Abz(N-Me))配對。
表3.一些D/A對的Ro值
供體
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受體
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Ro(?)
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熒光素 Fluorescein
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四甲基羅丹明 Tetramethylrhodamine
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49-56
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IAEDANS
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FITC
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49
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IAEDANS
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5-(碘乙酰胺基)熒光素 5-(Iodoacetamido)fluorescein
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49
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熒光素 Fluorescein
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熒光素 Fluorescein
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44
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EDANS
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DABCYL
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33
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色氨酸 Tryptophan
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IAEDANS
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22
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色氨酸 Tryptophan
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磺酰 Dansyl
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21-24
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色氨酸 Tryptophan
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Pyrene
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28
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磺酰 Dansyl
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熒光素 Fluorescein
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33-41
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奈 Naphthalene
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磺酰 Dansyl
|
22
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芘 Pyrene
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香豆素 Coumarin
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39
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B-藻紅蛋白 B-Phycoerythrin
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Cy5
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79
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表4.Tide Quencher 染料FRET應用推薦
注.建議使用綠色標記的FRET對,用青色標記的對可以使用,但效率不如綠色對標記。我們已經驗證,這些推薦的FRET對在我們的蛋白酶和核酸檢測分析中已表現出高靈敏度和低背景。除FRET效率外,還需要考慮其他因素,例如pH,多路復用和緩沖液干擾等。
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