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西安百螢生物科技有限公司 主營:百螢生物圍繞熒光發光、熒光標記、熒光探針等技術進行產品研發,公司產品廣泛用于核酸蛋白定量、細胞凋亡研究、細胞信號通路研究、細胞及線粒體膜電位檢測、細胞器染色、活體示蹤、抗體標記等科研領域。
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公司新聞

Tide Fluor和Tide Quencher染料選擇指南

Tide Fluor和Tide Quencher染料選擇指南

今天百螢總結了AAT Bioquest研發的Tide Fluor和Tide Quencher兩類染料的特點、使用方法等,希望可以為還不知道如何選擇這兩類產品的小伙伴一些幫助。


什么是Tide Fluor、Tide Quencher染料?

Tide Fluor和Tide Quencher是一類磷酰胺染料和CPG載體,用于制備FRET寡核苷酸,它們是經典染料(如FAM、HEX、TET和JOE)和上等低聚標記染料的**替代品。AAT Bioquest的Tide Fluor 染料(如TF1,TF2,TF3,TF4,TF5,TF6,TF7和TF8)具有比典型的熒光團(如熒光素,羅丹明和花青素)更強的熒光性和更高的光穩定性。我們的TF2的激發和發射波長與羧基熒光素(FAM)的激發波長和發射波長基本相同,這使其易于用于熒光素的生物學應用,但TF2具有更強的性能。與FAM探針相比,TF2在生理條件下具有更強的熒光,并且光穩定性更高。相比熒光素和Cy染料(如AlexaFluor® 和Cy3,Cy5和Cy7),Tide Fluor 染料具有更高的成本效益。

圖1.雜交誘導的分子信標寡核苷酸探針的熒光增強對比,該探針包含Tide Fluor 染料作為供體或Tide Quencher 染料作為受體。

除了杰出的Tide Fluor 供體染料外,Tide Quencher FRET受體染料(例如TQ1,TQ2,TQ3,TQ4,TQ5,TQ6和TQ7)經過優化,可與我們的Tide Fluor 染料和經典的熒光團(例如AMCA,EDANS,FAM,TAMRA,HEX,JOE,TET,ROX,Cy3,Cy5和Cy7)配對。與我們的Tide Fluor 供體染料一樣,我們的Tide Quencher 受體染料與市場上其他同類產品相比,也具有更高的成本效益,可滿足您所需的生物學應用。

為了方便研究,Tide Fluor 染料和Tide Quencher 染料擁有多種反應形式。對于寡核苷酸的合成標記,我們同時提供了Tide Fluor 和Tide Quencher 染料的亞磷酰胺及其CPG載體。對于寡核苷酸的后標記,我們提供氨基反應性和巰基反應性的Tide Fluor 和Tide Quencher 水溶性染料。


Tide Fluor與Tide Quencher特點

Tide Fluor染料 Tide Quencher染料
  • 經過優化,可與Tide Quencher 受體配對使用,以*大程度提高FRET電位
  • 較強的熒光強度可以增強檢測靈敏度
  • 對pH不敏感和對環境不敏感的熒光,使檢測更加方便簡單
  • 更高的光穩定性,可提高熒光成像的質量
  • 多種反應形式可用于綴合物
  • 功能強大:能夠探索其他淬滅劑可能無法達到的FRET電位。
  • 多種反應形式:方便自我構建所需的FRET生物分子
  • 匹配度高:與您所需的熒光供體完全匹配。
  • 性價比高:具有*佳的性能與便宜的價格。

Tide Fluor與Tide Quencher系列產品選擇指南

表1.Tide Fluor系列產品選擇指南

Tide Fluor 染料 Ex(nm) Em(nm) 主要應用功能*
Tide Fluor 1(TF1) 341 447

TF1被設計為EDANS熒光團的優良替代品,具有以下特征: 

  • 吸收更強
  • 更高的熒光強度
  • 對環境敏感的熒光較少
Tide Fluor 2(TF2) 499 522

TF2被設計為熒光素(FAM和FITC)的優良替代品,具有以下特征:

  • 在pH7時熒光強度更強
  • 對pH敏感的熒光更少
  • 光穩定性更高
Tide Fluor 3(TF3) 560 580

TF3被設計為Cy3熒光團的優良替代品,具有以下特征: 

  • 較強的熒光強度
  • 光穩定性更高
Tide Fluor 4(TF4) 588 610

TF4被設計為ROX和Texas Red熒光團的優良替代品,其具有以下特征:

  • 較強的熒光強度
  • 共軛產量更高
  • 更長的保質期
Tide Fluor 5(TF5) 649 664

TF5被設計為Cy5熒光團的優良替代品,具有以下功能: 

  • 較強的熒光強度
  • 光穩定性更高
Tide Fluor 6(TF6) 676 695

TF6被設計為Cy5.5熒光團的優良替代品,具有以下功能:

  • 較強的熒光強度
  • 光穩定性更高
Tide Fluor 7 (TF7) 749 775

TF7被設計為Cy7熒光團的優良替代品,具有以下功能:

  • 較強的熒光強度
  • 光穩定性更高
Tide Fluor 8 (TF8) 775 807 TF8是AAT Bioquest目前提供的*長波長的Tide Fluor 染料。其綴合物可用于基于NIR熒光探針的體內成像分析。


表2.Tide Quencher系列產品選擇指南

Tide Quencher染料 吸收(nm) 主要應用功能*
Tide Quencher 1(TQ1) ?490

TQ1被設計為DABCYL優良淬滅劑的替代品,具有以下特征:

  • 吸收更強
  • 更高的淬滅效率
  • 具有所需溶解度的多功能反應形式
Tide Quencher 2(TQ2) ~520 

TQ2被設計為FAM,HEX,TET,JOE,TF2和羅丹明6G的優良淬滅劑,具有以下特征:

  • 吸收更強
  • 更高的淬滅效率
  • 具有所需溶解度的多種反應形式
Tide Quencher 3 (TQ3) ~570 

TQ3被設計為TAMRA,TF3和Cy3的優良淬滅劑,具有以下特征:

  • 吸收更強
  • 更高的淬火效率
  • 具有所需溶解度的多種反應形式
Tide Quencher 4 (TQ4) ?600

TQ4被設計為ROX、TF和Texas Red的優良淬滅劑,具有以下特點:

  • 吸收更強
  • 更高的淬滅效率
  • 具有所需溶解度的多種反應形式
Tide Quencher 5(TQ5) ~660 

TQ5被設計為Cy5和TF5的優良淬滅劑,具有以下特征:

  • 吸收更強
  • 更高的淬火效率
  • 具有所需溶解度的多種反應形式
Tide Quencher 6 (TQ6) ~700

TQ6被設計為Cy5.5和TF6的優良淬滅劑,具有以下功能:

  • 吸收更強
  • 更高的淬滅效率
  • 具有所需溶解度的多種反應形式
Tide Quencher 7(TQ7) ~760 

TQ7被設計為Cy7和TF7的優良淬滅劑,具有以下功能:

  • 吸收更強
  • 更高的淬火效率
  • 具有所需溶解度的多種反應形式

選擇FRET的供體和受體

供體分子和受體分子的選擇可以相同,也可以不同。在大多數應用中,它們是不同的染料。FRET既可以通過受體敏化熒光的出現,也可以通過供體/受體的強度比變化(如果受體是熒光的)或供體熒光強度的降低來檢測。在后一種情況下,受體可以是熒光的或非熒光的。各種D/A對的Ro值可以明確的看出FRET的效率,FRET對的Ro值越大,FRET效率越高。熒光素/四甲基羅丹明對已被廣泛地用于開發FRET的分析。EDANS/DABCYL對已被廣泛用于開發FRET的核酸探針和蛋白酶底物。MCA(7-甲氧基香豆素-4-乙酸)和DNP(2,4-二硝基苯胺)是開發熒光探針的另一對供體/受體。與EDANS/DABCYL對相比,MCA/DNP對的熒光信號波長通常較短且較弱。然而,由于波長較小,MCA/DNP對往往表現出更好的親和力。DNP也是一種很好的FRET受體,與色氨酸(Trp)、2-氨基苯甲酸(Abz)或Abz衍生物(如Abz(N-Me))配對。

表3.一些D/A對的Ro

供體 受體 Ro(?)
熒光素 Fluorescein 四甲基羅丹明 Tetramethylrhodamine 49-56
IAEDANS FITC 49
IAEDANS 5-(碘乙酰胺基)熒光素 5-(Iodoacetamido)fluorescein 49
熒光素 Fluorescein 熒光素 Fluorescein 44
EDANS DABCYL 33
色氨酸 Tryptophan IAEDANS 22
色氨酸 Tryptophan 磺酰 Dansyl 21-24
色氨酸 Tryptophan Pyrene 28
磺酰 Dansyl 熒光素 Fluorescein 33-41
奈 Naphthalene 磺酰 Dansyl 22
芘 Pyrene 香豆素 Coumarin 39
B-藻紅蛋白 B-Phycoerythrin Cy5 79


表4.Tide Quencher 染料FRET應用推薦

注.建議使用綠色標記的FRET對,用青色標記的對可以使用,但效率不如綠色對標記。我們已經驗證,這些推薦的FRET對在我們的蛋白酶和核酸檢測分析中已表現出高靈敏度和低背景。除FRET效率外,還需要考慮其他因素,例如pH,多路復用和緩沖液干擾等。


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