許多小伙伴不知道自己檢測細胞增殖的時候究竟該檢測什么?使用哪些試劑?今天,百螢將總結的可以測量細胞增殖的方法、試劑、適用儀器等分享給大家。
細胞增殖可以通過測量諸如新合成的DNA、總核酸含量或細胞分裂等參數來確定(見表1)。 *簡單的方法是使用可與胺反應的細胞跟蹤指示劑(例如CytoTell 染料)監視細胞分裂,這些可滲透細胞的指示劑與細胞質蛋白共價結合。由于這種共價偶聯反應,CytoTell 染料無法轉移到相鄰細胞中,并且可以在細胞中保留好幾代(*多可以觀察到9代)。隨著細胞分裂,CytoTell 染料在子細胞之間均等分布,并且每一代新細胞的熒光強度均是其親本的一半??梢允褂脴藴实暮兹┕潭▌┖突谠碥盏耐富彌_液對用CytoTell 染料標記的細胞進行固定和透化,以進行進一步的細胞內分析。
表1.用于檢測細胞增殖的試劑和檢測列表。
檢測類型
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原理
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試劑/測定
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儀器
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檢測細胞分裂
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使用與細胞質蛋白結合的可滲透細胞的染料。(隨著細胞分裂,染料被轉移到子細胞。新一代細胞的熒光強度是其親本的一半。)
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CytoTell 染料
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熒光酶標儀,熒光顯微鏡或流式細胞儀
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CytoTrace 染料
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ReadiUse CFSE
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檢測新合成的DNA
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在細胞周期的S期將修飾的核苷酸摻入新合成的DNA中。一旦摻入,這些核苷類似物就可以用作細胞周期和增殖標記物,可以使用標記的探針進行檢測以鑒定增殖細胞。
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Bucculite dT摻入細胞增殖熒光成像試劑盒
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熒光顯微鏡
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BrdU (需要酶或熒光團標記的抗BrdU抗體)
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可適用于比色,熒光或化學發光儀器
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檢測總核酸含量
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使用可滲透細胞的核酸染色劑,該試劑能展現出與DNA質量成比例的發射信號。然后對染色的群體進行流式細胞術分析,以生成DNA直方圖,觀察細胞周期每個階段中細胞的百分比。
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Cell Meter 熒光活細胞周期檢測
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流式細胞儀
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Cell Meter 熒光固定細胞周期檢測
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核紫 LCS1 活細胞染料
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Hoechst 33258,Hoechst 33342 和 DAPI
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