用于GPCR和鈣離子通道功能分析的一系列鈣指示劑（三）

今天百螢給大家介紹一下AAT Bioquest除綠色鈣離子熒光探針之外的其他鈣離子熒光探針。除綠色熒光外，AAT Bioquest出售的鈣離子熒光探針還有哪些？它們的性能如何？它們適用于哪些實驗？適用于哪些儀器？一起來看看吧！

AAT Bioquest出售的其他鈣離子熒光探針

Calbryte -590, AM

Calbryte 590 是對橙紅色熒光指示劑（例如Calcium Orange 和Rhod-2）的升級版。該染料在580 nm處具有*大激發，并被555 nm激光線充分激發。它的*大發射波長為592 nm，與TRITC / Cy3濾光片組兼容。在相同的條件下，Calbryte 590對鈣的敏感性是Rhod-2的十倍左右。此外，與主要位于線粒體中的Rhod-2不同，Calbryte 590可以很好地保留在細胞的細胞質中。 

Calbryte-590的產品特點：

1.與GFP兼容的紅移鈣指示劑
2.Calcium Orange和Rhod-2的上等替代品
3.靈敏度是Rhod-2的十倍
4.與細胞中的Rhod-2和Cal-590相比，大大提高了信噪比
5.明顯增強細胞內保留
6.細胞質定位

圖1.用Calbryte 590和Rhod-2在不含丙磺舒的情況下，檢測CHO-K1細胞中的內源性P2Y受體。

Calbryte -630, AM

Calbryte 630 是我們對紅色和深紅色熒光指示劑（例如X-Rhod-1）的升級版。這種染料的*大激發波長為608 nm，該染料的*大發射波長為624 nm，并且與常見的Texas Red濾光片組兼容。由于它與光譜的綠**域相距較遠，因此Calbryte 630非常適合與綠色熒光標記（例如  iFluor 488，  Alexa Fluor 488  或  GFP 復用。此外，Calbryte 630的長發射波長使其非常適合研究深部組織。這是因為較長波長的染料更容易穿透許多細胞層，而短波長的染料則不能。 

Calbryte 630 AM的產品特點：

1.與GFP兼容的紅移鈣指示劑
2.X-Rhod-1和Cal 630的**替代品
3.明顯增強的細胞內保留
4.非常適合與綠色熒光標記（例如iFluor 488，Alexa Fluor 488或GFP）復用

Rhod-4

Rhod-4是我們針對Rhod-2的缺點研發出來的升級產品。Rhod-4 除可以激發514 nm，532 nm和546 nm之外，還可以用488 nm的氬離子激發光很好地激發。Rhod-4 的主要特征是細胞質定位，長多波長激發和大于100倍的熒光增強（當與鈣形成復合物時），使其成為測量細胞鈣的理想指標，尤其是當化合物具有強熒光時并且應用程序需要GFP。我們的Rhod-4 AM在細胞中的亮度比Rhod-2 AM高4倍以上。這一特性使Rhod-4 對于HTS應用的效果更好。

Rhod-4產品特點：

1. 細胞質定位：Rhod-4 AM主要定位在細胞質中，而Rhod-2 AM主要定位在線粒體中。
2. 多種激發選項：?490 nm，514 nm，532 nm和546 nm;
3. 更高的熒光強度：比Rhod-2 AM好10倍；
4. 更高熒光信號：在Ex 530 nm / Em 570 nm處，比Rhod-2 AM亮度高4倍。 

圖3.使用Screen Quest Rhod-4 NW分析試劑盒和Rhod-2 AM在HEK-293細胞中測定了卡巴膽堿劑量反應。 將HEK-293細胞以40,000個細胞/ 100 μL /孔在Costar黑色96孔板中過夜接種。 使用Screen Quest Rhod-4 NW鈣測定試劑盒或100 μL Rhod-2 AM溶液（5 μM）在室溫下將細胞與100 μL染料上載溶液孵育1小時。 NOVOstar（BMG Labtech）添加了卡巴膽堿（25μL /孔）以達到*終指示的濃度。 使用Rhod-4 NW的卡巴膽堿的EC50約為0.6 μM。

圖4.使用Rhod-4 AM（Cat＃21120）和Rhod-2 AM（Cat＃21064）在CHO-K1細胞中測量了ATP刺激的內源性P2Y受體鈣反應。 將CHO-K1細胞以50,000個細胞/ 100 μL /孔在Costar 黑色96孔板中過夜接種。 除去生長培養基，并用Rhod-4 AM（4 μM，A和B）或Rhod-2 AM（4 μM，C和D）將100 μL染料加載溶液在室溫下孵育細胞1小時。 用200 μL HHBS代替染色液，然后在ATP處理之前（A和C）和之后（B和D）使用TRITC通道通過熒光顯微鏡（Olympus IX71）對細胞成像。

Cal Red R525 / 650 AM

Cal Red R525 / 650是一種用于新型的488 nm可激發比例的熒光鈣指示劑。當進入細胞前，Cal Red R525 / 650的熒光很弱，一旦進入細胞，親脂性AM阻斷基團就會被細胞內酯酶裂解，導致帶負電荷的熒光染料很好地保留在細胞中，激發波長接近488 nm，并且在525 nm和650 nm處有兩次發射。當用生物活性化合物刺激細胞時，該受體會引發細胞內鈣的釋放，該鈣被Cal Red R525 / 650螯合。當在488 nm激發時，發射信號在525 nm處增加，在650 nm處降低。Cal Red R525 / 650的激發和發射波長與普通濾光片組兼容，對細胞的損害*小，使其成為評估和篩選GPCR激動劑和拮抗劑以及鈣通道靶標的強大工具。

Fura-8 , AM/Fura-10 , AM

AAT Bioquest研發的Fura-8 ，為了進一步改善Fura-2的鈣離子反應時出現的一些缺陷。Fura-8的發射光線移到了更長的可見光波長，與普通濾光片兼容。它具有與Fura-2相當的鈣親和力。與Fura-2 AM相比，Fura-8 AM對鈣的敏感性更高，信號/背景比更高。Fura-10 , AM，的研發是為了讓熒光信號更好的保留在細胞內，是Fura-8的升級產品，在沒有丙磺舒的情況下，Fura 10表現出信號/背景比的比Fura-8要強上許多。

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