今天百螢為大家介紹一下關于ELISA的小知識，什么是ELISA？ELISA的檢測方法有哪些？優缺點是什么？*好用的ELISA檢測試劑/試劑盒是什么？感興趣的朋友一起來看看吧！
酶聯**吸附測定法（ELISA）是一種使用酶標儀進行測定的**測定法，用于檢測和定量生物分子，例如抗體、蛋白質、**或肽，以及表征蛋白質-蛋白質和蛋白質-核酸相互作用。在ELISA中，將用于實驗的靶標（通常是抗原）固定在固體表面上，然后用辣根過氧化物酶（HRP）或堿性磷酸酶（AP）的酶綴合抗體進行檢測。通過與被酶催化的底物孵育來實現定量，從而產生可測量的副產物。
酶聯**吸附測定（ELISA）概述
ELISA測定法通常在96孔板中進行。這些板被設計成通常通過直接吸附到微量滴定板的表面上或間接地通過預先包被的抗體間接地結合和固定抗原。固定后，將一抗引入樣品中，與抗原形成**復合物。一抗可以共價標記到酶（例如HRP）上，或者如果一抗被生物素標記，則一抗本身可以使用酶標記的二級抗體或鏈霉親和素偶聯物間接檢測。通過與合適的底物孵育來評估共軛酶的活性，從而實現檢測，該底物會產生可測量的副產物。試劑盒在靈敏度和成像設備的兼容性方面各不相同。
直接與間接檢測
在ELISA中檢測**抗體-抗原復合物的方法可以是直接的或間接的（圖1）。在直接檢測方法中，與報告酶（例如HRP或AP）綴合的單一一抗可以直接檢測靶抗原。通過間接檢測，可以依次使用雙抗體系統檢測目標靶標。首先，將樣品與針對目標抗原的未標記一抗孵育。然后，使用一抗特異的酶標二抗檢測其存在，從而檢測靶抗原。如果使用生物素化的一抗檢測抗原，則使用酶標記的抗生蛋白鏈菌素偶聯物作為您的**檢測試劑。
使用哪種檢測方法取決于靶抗原的表達水平。為了檢測高度表達的抗原，直接檢測是合適的方法。當靈敏度至關重要時，例如檢測低豐度靶標或表達**的抗原，請使用間接檢測方法來增強信號。
圖1.使用靶標特異性抗體進行直接和間接抗原檢測的圖示。
ELISA的三種檢測方法
1.直接法
在直接ELISA中，抗原通過被動吸附直接固定在板的表面，并使用HRP標記的一抗進行檢測。將無色底物引入樣品，該底物與酶結合物反應，并產生可測量的副產物。根據底物的選擇，該副產物可以是比色的，化學發光的或熒光的。信號產生的大小與樣品中抗原的數量成正比。在所有ELISA法中，直接ELISA分析*簡單，執行*快，但靈敏度*低。
方案：比色直接ELISA
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用檢測抗原包被ELISA板，密封板并在4°C下孵育過夜
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去除染料溶液并用所需的緩沖液洗板2次
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在4°C下用所需的封閉溶液封閉板1小時
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用緩沖液洗板3次
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與HRP標記的一抗在室溫下孵育1小時
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用緩沖液洗板4次
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在室溫下用ReadiUse TMB底物溶液（#11012）接種板15-30分鐘。
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使用Signal Guard HRP反應停止溶液（#11020）停止反應
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用ELISA酶標儀測量650 nm處的吸光度信號
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圖2：直接ELISA圖解。
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直接ELISA檢測
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優點
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簡單快捷，需要更少的試劑和更少的步驟
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消除了二抗的交叉反應
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缺點
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抗原固定不明確會導致潛在的高背景干擾
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一抗必須單獨標記，這既費時又昂貴
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酶對一抗偶聯物的**反應性可能會產生不利影響
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柔韌性低，因為必須偶聯一抗
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無信號放大
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2.間接法
間接ELISA本質上是直接ELISA的修改版本。在間接ELISA中，用于檢測抗原的一抗是未偶聯的。取而代之的是，對一抗的宿主物種具有反應性的酶標二級抗體被用于檢測一抗-抗原復合物（間接檢測抗原）。將無色底物引入樣品，該底物與酶結合物反應，并產生可測量的副產物。根據底物的選擇，該副產物可以是比色的，化學發光的或熒光的。信號產生的大小與樣品中抗原的數量成正比。與直接ELISA相比，使用輔助檢測試劑具有明顯的優勢，即信號放大。
方案：比色間接ELISA
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用檢測抗原包被ELISA板，密封板并在4°C下孵育過夜
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去除染料溶液并用所需的緩沖液洗板2次
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在4°C下用所需的封閉溶液封閉板1小時
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用緩沖液洗板2次
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與未偶聯的一抗在室溫下孵育1小時
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用緩沖液洗板4次
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在室溫下與HRP標記的二抗（在封閉緩沖液中）孵育1小時
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用緩沖液洗板4次
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在室溫下用ReadiUse TMB底物溶液（#11012）接種板15-30分鐘。
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使用Signal Guard HRP反應停止溶液（#11020）停止反應
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用ELISA酶標儀測量650 nm處的吸光度信號
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圖3：間接ELISA圖解。
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間接ELISA檢測
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優點
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方便-多種預標記的二抗可商購
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經濟–需要更少的標記抗體
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高度敏感–一抗包含多種表位，可結合幾種標記的二抗，導致信號放大
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非常靈活–單個二抗可用于檢測不同的一抗
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保留一抗的*大**反應性
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相同的一抗（例如生物素/鏈霉親和素）可以使用不同的可視化標記
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缺點
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來自二抗的潛在交叉反應，導致非特異性染色
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與直接ELISA相比更長的操作流程需要額外的孵育步驟
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3.夾心法
夾心ELISA分析是*常用的ELISA形式。它需要使用匹配的抗體對，從而每種抗體對抗原上不同的非重疊表位具有特異性。首先將一種抗體，稱為捕獲抗體，包被在多孔微量滴定板的表面上，以促進靶抗原的固定。然后，**種抗體（稱為檢測抗體）與捕獲抗體-抗原復合物結合。*后，添加對檢測抗體（而非捕獲抗體）具有特異性的酶標記的**抗體偶聯物。
方案：比色夾心ELISA
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用捕獲抗體，密封板包被PCV微量滴定板的孔，并在4°C下孵育過夜
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去除染料溶液并用所需的緩沖液洗板2次
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在4°C下用所需的封閉溶液封閉板1小時
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用所需緩沖液洗板2次
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向每個孔中添加樣品，在37°C下孵育2小時
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取出樣品并用所需緩沖液洗板2次
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與未偶聯的檢測抗體在室溫下孵育1小時
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用所需緩沖液洗板4次
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在室溫下與HRP標記的二抗（在封閉緩沖液中）孵育1小時
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用所需緩沖液洗板4次
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在室溫下用ReadiUse TMB底物溶液（貨號11012）接種板15-30分鐘。
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使用Signal Guard HRP反應停止溶液（目錄號11020）停止反應
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用ELISA酶標儀測量650 nm處的吸光度信號
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圖4：夾心ELISA圖解。
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夾心ELISA檢測
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優點
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高靈敏度–靈敏度比直接或間接ELISA形式高2至5倍
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非常靈活–直接和間接檢測均可使用
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高特異性–由于使用了匹配的抗體對，因此可以特異性地捕獲和檢測抗原
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適用于復雜，粗略或不純的樣品–抗原無需在測量前純化
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缺點
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優化匹配抗體對可能很困難–捕獲和檢測抗體可能會發生交叉反應
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通用ELISA測定試劑盒
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貨號
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產品名稱
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Ex（nm）
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Em（nm）
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規格
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價格
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11540
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Amplite 熒光法羊抗鼠IgG-HRP偶聯物ELISA檢測試劑盒 紅色熒光
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571
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585
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1000 Tests
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2460
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11541
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Amplite 熒光法羊抗兔IgG-HRP偶聯物ELISA檢測試劑盒 紅色熒光
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571
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585
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1000 Tests
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2460
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36370
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Screen Quest cAMP檢測試劑盒*比色ELISA法*
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650
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1 plate
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3720
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36371
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Screen Quest cAMP檢測試劑盒*比色ELISA法*
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650
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10 plate
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24576
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36373
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Screen Quest cAMP檢測試劑盒*熒光ELISA法*
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571
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585
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1 plate
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3720
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36374
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Screen Quest cAMP檢測試劑盒*熒光ELISA法*
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571
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585
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10 plate
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24576
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36379
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Screen Quest 免洗cAMP檢測試劑盒*熒光能量共振轉移法*
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390
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650
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1 plate
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6240
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36380
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Screen Quest 免洗cAMP檢測試劑盒*熒光能量共振轉移法*
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390
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650
|
10 plate
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10716
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36381
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Screen Quest 免洗cAMP檢測試劑盒*熒光能量共振轉移法*
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390
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650
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50 plate
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44100
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