JJ Red和JJ Green是百螢生物自主研發的核酸染料,JJ Green是一種結合于所有dsDNA雙螺旋的具有紅色/綠色激發波長的染料,它是Gel Red/Green、SYBR、EB核酸染料的替代品。今天小螢為大家帶來的是這種核酸染料的相關問題解答。
1.在使用該染料進行凝膠電泳時,Marker分辨率低的主要原因是什么?
答:①Marker的加樣量:marker有一個推薦濃度范圍,選擇高的,樣品與Marker含量差別大, 也會造成條帶錯誤(這不會是染料的問題,用EB也會存在該問題)。正確的DNA上樣量是條帶清晰的保證。Marker應該選擇在目標片段大小附近的梯帶較密的,這樣比對才準確。另外注意的是,Marker的電泳條件也要符合DNA電泳的操作標準: 如果選擇λDNA/EcoR I的酶切marker,需要預先65℃加熱5min,冰上冷卻后使用。從而避免Hind Ⅲ或EcoR I酶切造成的粘性接頭導致的片段連接不規則或條帶信號弱等現象。
②凝膠不平整:梳子不干凈有污染,加樣孔不平整也會影響圖的效果;
③電泳條件:電壓不穩,電泳時間不超過1h。電壓過高,會導致小片段跑出膠,出現條帶缺失現象。
④緩沖液:TBE的緩沖能力更強,如果緩沖液緩沖性能下降,會導致DNA電泳條帶模糊,不規則遷移等。TAE建議換成TBE效果更好。另外建議配膠時的緩沖液和電泳緩沖液是同時配制。
④染色劑:JJ Red是高靈敏的DNA熒光染料,適用于各種電泳分析,操作簡單:無須脫色或沖洗。至少可檢出20pg DNA,高于EB染色法25-100倍。JJ Red 與dsDNA 結合熒光信號會增強800-1000倍,用JJ Red染色的凝膠樣品熒光信號強,背景信號低??蛇m用于多種電泳分析。注意觀察凝膠時應根據染料不同,使用合適的光源和激發波長,如果激發波長不對,條帶會出現模糊等情況。
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2.在JJ Red / JJ Green性如何?
答:JJ Red / JJ Green已經被證明是替代EB、Gel、SYBR染料更為的產品。不過,請使用這些試劑時,也要遵循實驗室條例等。
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3.JJ Red / JJ Green的結合機制是什么?
答:JJ Red/ JJ Green作用原理通過靜電及電荷相互作用的結合。
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4.JJ Red / JJ Green檢測下限是什么?
答:JJ Red/ JJ Green是超敏感的染料,至少可檢出20pg DNA。然而,染色的靈敏度取決于儀器的性能和曝光設置等。
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5.可以重新融化JJ Red / JJ Green凝膠,再制備嗎?
答:可以,但好再添加一些染料,保證重新制備凝膠的信號強度。
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6.可以提前制作JJ Red / JJ Green凝膠,儲存供以后使用嗎?
答:JJ Red和JJ Green染料是穩定的。在保證瓊脂糖凝膠的完整性不會被破壞的前提下,你可以將預制的JJ Red / JJ Green凝膠儲存供以后使用。我們建議在2-8℃避光貯存凝膠。
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7.用哪些儀器檢測JJ Red和JJ Green?
答:JJ Red兼容紫外透射儀和藍光透射儀,以及基于汞弧燈和氬離子激光的凝膠掃描儀。JJ Green可使用300 nm紫外透射儀檢測。
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8.JJ Red和JJ Green可以用來染色單鏈DNA或RNA嗎?
答:JJ Red和JJ Green可用于單鏈DNA和RNA的染色,但JJ Red染單鏈核酸效果比JJ Green敏感5倍左右。使用熒光酶標儀的滴定實驗表明,JJ Red結合單鏈DNA和RNA熒光信號約是結合雙鏈DNA的一半左右。
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