今天百螢為大家介紹一個非常實用的小技巧,用于確定熒光分子的亮度。如果你想選購一種熒光探針,而你已經確切的了解到了幾種探針均可以滿足你的實驗要求,但是,哪一個才是熒光強度好的呢?求人不如求己,實驗還得靠自己!今天小螢告訴你之后,請收藏好它!
熒光分子的亮度取決于兩個因素:
1. 消光系數(ε):熒光分子吸收特定波長的光的強度。
2. 熒光量子產率(Φ):吸收光轉換為發射光的效率。
有小伙伴要問了,知道了消光系數和熒光量子產率又該怎么辦呢?請記住以下公式:
亮度=消光系數(ε) x 熒光量子產率(Φ)
實例驗證:大家對于PE、APC、Cy5應該都是比較熟悉的。
· PE = 1,960,000 cm-1M-1 (ε)x 0.84(Φ) = 1646400
· APC = 700,000 cm-1M-1 (ε)x 0.68 (Φ)= 476000
· Cy5 = 250,000 cm-1M-1 (ε)x 0.20 (Φ)= 50000
現在相信大家不用我說,也能看出哪個更亮了吧!那有小伙伴又要問了,可是熒光探針那么多,我找不到確切的消光系數和熒光量子產量??!別著急,下面是我們為您總結好的常用的產品消光系數和熒光量子產率請收好!
產品名稱
|
消光系數(ε)cm-1M-1
|
熒光量子產率(Φ)
|
備注
|
iFluor 350
|
20000
|
0.95
|
在水性緩沖液中(pH=7.2)
|
iFluor 405
|
37000
|
0.91
|
iFluor 430
|
40000
|
0.78
|
iFluor 450
|
40000
|
0.82
|
iFluor 488
|
75000
|
0.9
|
iFluor 514
|
80000
|
0.83
|
iFluor 532
|
90000
|
0.68
|
iFluor 546
|
100000
|
0.67
|
iFluor 555
|
100000
|
0.64
|
iFluor 560
|
120000
|
0.57
|
iFluor 568
|
100000
|
0.57
|
iFluor 594
|
180000
|
0.53
|
iFluor 610
|
110000
|
0.85
|
iFluor 633
|
250000
|
0.29
|
iFluor 647
|
250000
|
0.25
|
iFluor 660
|
250000
|
0.26
|
iFluor 670
|
250000
|
0.63
|
iFluor 680
|
220000
|
0.23
|
iFluor 700
|
220000
|
0.23
|
iFluor 750
|
275000
|
0.12
|
iFluor 790
|
250000
|
0.13
|
iFluor 800
|
250000
|
0.11
|
iFluor 810
|
250000
|
0.05
|
iFluor 820
|
250000
|
N/D
|
iFluor 840
|
200000
|
0.02
|
在PBS中
|
產品名稱
|
消光系數(ε)cm-1M-1
|
熒光量子產率(Φ)
|
備注
|
Alexa Fluor 488
|
73000
|
0.92
|
緩沖液(pH=7.2)
|
Alexa Fluor 532
|
81000
|
0.61
|
Alexa Fluor 546
|
112000
|
0.1
|
Alexa Fluor 568
|
88000
|
0.69
|
Alexa Fluor 594
|
92000
|
0.66
|
Alexa Fluor 647
|
270000
|
0.33
|
Alexa Fluor 660
|
132000
|
0.37
|
Alexa Fluor 680
|
183000
|
0.36
|
Alexa Fluor 700
|
205000
|
0.25
|
Alexa Fluor 750
|
290000
|
0.12
|
產品名稱
|
消光系數(ε)cm-1M-1
|
熒光量子產率(Φ)
|
備注
|
Cy3
|
150000
|
0.04
|
|
Cy3B
|
120000
|
0.58
|
|
Cy3B酸
|
120000
|
0.58
|
|
Cy5
|
250000
|
0.27(PBS)/0.4(乙醇)
|
|
Fluo-4
|
82000
|
0.16
|
|
Fluo-8
|
23430
|
0.16
|
|
Cal-590
|
78000
|
0.62
|
|
7-AAD
|
27500
|
0.02
|
在雙鏈DNA結合的情況下
|
AFC
|
17000
|
0.53
|
在乙醇中
|
Hoechst 33258
|
46000
|
0.034
|
|
SYTO 17
|
88000
|
0.964
|
|
SYTOX綠色
|
67000
|
0.53
|
在DNA中
|
JOJO-1
|
171000
|
0.44
|
在DNA中
|
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