英文名稱：Portelite? Fluorimetric High Sensitivity DNA Quantitation Kit *Optimized for CytoCite? and Qubit? Fluorometers*

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產品規格：100 Tests   500Tests 

產品概述

DNA定量試劑盒是美國AAT Bioquest生產的用于定量DNA的試劑盒，DNA定量是用于各種基因組分析的DNA樣品制備中非常重要的。 這種Portelite dsDNA定量試劑盒提供了一種使用手持式熒光分析儀使用Helixyte Green探針定量dsDNA的快速方法。 它針對Cytocite 和Qubit 熒光計進行了優化。 Portelite dsDNA定量分析線性超過五個數量級。 該測定法對RNA上的雙鏈DNA（dsDNA）具有高度選擇性，并且設計為對于25pg / uL至100ng / uL的初始樣品濃度是準確的。 Helixyte Green在與dsDNA結合后表現出大的熒光增強，并且比UV吸光度讀數更敏感。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供的DNA定量試劑盒。 

適用儀器

實驗方案

操作步驟

簡要概述

準備Helixyte 綠色工作溶液
在每個0.2 mL PCR管中加入190μL1XHelixyte Green 工作溶液（Cat＃：CCT100）
將10μLDNA標準品或測試樣品加入每個試管中
在室溫下孵育2分鐘
使用CytoCite 熒光分析儀或Qubit 熒光分析儀監測熒光

溶液制備

Helixyte Green 工作溶液制備：
為10個樣品制備足夠的工作溶液，將10μL Helixyte Green （組分A）加入2 mL DNA分析緩沖液（組分B）中。 注意：用鋁箔覆蓋或將其置于黑暗中，以保護工作溶液免受光照。 注意：我們建議將此溶液用塑料容器而不是玻璃制備，因為染料可能會吸附到玻璃表面。 為獲得佳效果，該溶液應在其制備后幾小時內使用。

樣品實驗方案

樣品體積是1~20μL（取決于DNA樣品的估計濃度）。推薦樣品體積為10μL，DNA濃度范圍為0.5~10 ng /μL。如果使用其他樣品量，請在濃度計算中調整稀釋倍數。

1.基于10μL樣品體積生成以下方案，DNA濃度在0.5~10 ng /μL范圍內。

1.1在每個Cytocite 樣品管（＃CCT100）或等效的0.2 mL PCR管中加入190μL1XHelixyte Green 工作溶液注意：使用薄壁聚丙烯，透明的0.2 mL PCR管，如＃CCT100。

1.2將DNA標準品或測試樣品10μL加入每個試管中，然后渦旋混合2~3秒。

1.3讓所有試管在室溫下孵育2分鐘。

1.4將樣品插入CytoCite 或Quibit ，并用綠色熒光通道監測熒光。按照適用于CytoCite 熒光分析儀的步驟進行操作。

2.標準校準曲線的制備

對于Portelite 分析，您可以選擇使用DNA標準制作校準曲線。 以下是生成定制DNA標準曲線的簡要方案：

2.1用DNA Assay Buffer進行稀釋，得到10,8,6,4,2,1,0.5,0 ng /μLDNA標準稀釋液。

2.2將190μLHelixyteGreen 工作溶液加入0.2 mL PCR管中。

2.3每管加入10μL標準品或10μL樣品。

2.4在室溫下孵育反應2分鐘。

2.5將樣品插入CytoCite 并用綠色熒光通道檢測熒光。

數據分析

     從空白標準孔獲得的讀數（RFU）用作陰性對照。 從其他標準的讀數中減去該值，以獲得基線校正值。 然后，繪制標準讀數以獲得標準曲線和方程。 該等式可用于計算濃度樣本。 我們建議使用在線線性回歸計算器。