肌動蛋白是形成微絲的高度保守的蛋白質家族，由于其在真核細胞中的細胞內含量豐富，在微摩爾濃度范圍內，肌動蛋白參與的蛋白質-蛋白質相互作用比任何其他已知蛋白質都要多。鬼筆環肽的熒光衍生物已被證明在定位固定細胞和組織中的肌動蛋白絲以及在體外觀察單個肌動蛋白絲方面非常有用。

      肌動蛋白具有從其單體狀態聚合成絲狀肌動蛋白（F-肌動蛋白）的獨特能力。F-肌動蛋白和調節蛋白之間的相互作用迅速組裝和分解肌動蛋白絲，將其組織成肌動蛋白束和細胞骨架網絡。這些高階結構為多種細胞過程提供必要的結構支持，包括細胞內轉運、胞質分裂、細胞運動、極性和細胞形狀、基因調控和信號轉導。因為肌動蛋白在許多生物過程中是必不可少的，所以研究中必須使用工具（肌動蛋白特異性抗體和鬼筆環肽衍生染色劑）來觀察這些肌動蛋白結構。

  圖1.核藍DCS1死細胞染料（貨號17548）

圖2.MitoLite線粒體綠色熒光探針（貨號22675）

圖3.核藍DCS1死細胞染料（貨號23125）

圖4.復合圖片

熒光合成頭像。使用MitoLite線粒體綠色熒光探針（貨號22675）對活Hela細胞進行染色并成像。在4%甲醛中固定后，用核藍DCS1死細胞染料（貨號23125）和核藍DCS1死細胞染料 （貨號17548）對細胞進行染色。

肌動蛋白染色方案

以下是鬼筆環肽-iFluor 488標記（貨號23115）對培養細胞中的F-肌動蛋白進行染色的示例方案。

注意：

1.鬼筆環肽是有毒的，應小心處理 ；     

2.在適當條件下儲存時，鬼筆環肽-iFluor綴合物可穩定至少6個月，如果不立即使用，請將它儲存在-20℃以下，避光并避免凍融循環。

材料：

1.鬼筆環肽-iFluor 488標記（貨號23115）

2.PBS緩沖液

3.3.0-4.0%無甲醛甲醇

4.牛血清蛋白

5.細胞培養

方案如下：

1.將鬼筆環肽-iFluor488標記小瓶加熱至室溫，并在打開前短暫離心。

2.將30uL 1000X 鬼筆環肽-iFluor488標記DMSO溶液添加到1mL含1%牛血清蛋白中，制備1X 鬼筆環肽-iFluor488標記工作溶液，并將溶液充分混合。這使得染色溶液足以用于10個孔，每孔100uL。將未使用的1000X鬼筆環肽-iFluor488標記DMSO庫存溶液等分并在適當的條件下儲存。

注意：

1.不同細胞類型的染色可能有所不同。為了獲得好的性能，應相應地制備鬼筆環肽結合物工作溶液的濃度。

2.將細胞在含 3.0 - 4.0% 無甲醛甲醇的 牛血清蛋白溶液中室溫固定 10 至 30 分鐘。避免使用任何含有甲醇的固定劑，因為甲醇會在固定過程中破壞肌動蛋白。

3.小心吸出固定液。

4.在牛血清蛋白中沖洗固定細胞2-3次。

5.用 牛血清蛋白 中的 10 mM 乙醇胺淬滅過量的甲醛 5 分鐘。

6.在 96 孔板中，向細胞中添加 100 μL/孔的鬼筆環肽-iFluor488標記工作溶液。在室溫下將細胞染色 20 至 90 分鐘。

7.用 牛血清蛋白 輕輕沖洗細胞 2 至 3 次，以去除多余的鬼筆環肽結合物。

8.使用配備適當濾光片組的熒光顯微鏡觀察細胞。鬼筆環肽-iFluor488標記需要 FITC 濾光片組才能可視化。