細胞增殖測定是在細胞生物學發現研究中具有廣泛應用價值的工具。它們通常用于評估正常細胞的健康狀況，對評估新型化療藥品的抗增殖效力和復合毒性至關重要。AAT Bioquest 提供了幾種評估細胞增殖的策略，這些策略基于跟蹤細胞分裂的世代或監測細胞健康的關鍵參數，包括代謝活性、 DNA 合成或 ATP 濃度。從廣泛的傳統比色測定試劑中選擇用于確定細胞增殖的試劑，特別是四唑鹽，以及用于流式細胞術、成像和微孔板應用的幾種高度敏感的基于熒光的測定方法。
一．細胞增殖的測定方法
測定細胞增殖準確的方法是在 DNA 復制過程中通過 BrdU摻入來測定新合成的 DNA。盡管這種方法具有高度的準確性和可重復性，但由于隨后用熒光抗 BrdU 抗體進行檢測是測量增殖所必需的，因此這種方法可能相當繁瑣?；蛘?，通過用 WST，resazurin 或細胞酯酶分離染料測量代謝活性的速率或用 CytoTellTM 染料或 CFSE 跟蹤細胞分裂的世代，可以更快地評估細胞增殖。選擇適合的細胞增殖試驗主要取決于細胞類型，研究方案，以及希望研究的作用機制。
二．DNA合成細胞增殖實驗
原位測定新合成的 DNA 是鑒定增殖細胞可靠方法。實現這一點的方法是在細胞周期的 S 期將 BrdU細胞增殖檢測試劑 (17030)添加到新復制的 DNA 中。然后可以使用熒光標記的抗 BrdU 抗體來測量增殖的 BrdU 標記細胞。BrdU 染色適用于各種應用，包括 IHC、 ICC 和 ELISA，并且可以用流式細胞術中適合的其他生物標志物進行染色。我們提供用 PE (V103305)標記的小鼠單克隆抗 BrdU 抗體克隆 Bu20a 和未標記的小鼠單克隆抗 BrdU 抗體克隆 Bu20a (V103300)和克隆 MoBu-1(V103295)的熒光綴合物，其可以用我們亮和光穩定的 iFluor系列染料標記。
點擊-化學驅動的 BucculiteTM XdU 細胞增殖測定
與 BrdU 測定不同，BucculiteTM XdU 細胞增殖測定不依賴于抗體來量化新生 DNA，也不需要 DNA 變性來促進 BrdU 標記核苷的抗體檢測。相反，BucculiteTM XdU 細胞增殖測定使用含炔的胸苷類似物 XdU 的專有混合物，其摻入到新合成的 DNA 中，隨后通過銅催化的疊氮化物-炔環加成檢測(即單擊反應，圖1)。
細胞增殖測定原理。在 XdU 存在下的增殖細胞在 S 期加入了胸腺嘧啶堿基的化合物。熒光標記的疊氮化合物與摻入的 XdU 反應，以便通過成像或流式細胞儀進行檢測(圖在 BioRender 中制作)。
由于點擊反應利用雙正交部分檢測增殖細胞，背景干擾是小的。更重要的是，由于反應條件溫和，BucculiteTM XdU 細胞增殖測定法保留了細胞形態，抗原結合位點和樣品完整性，為用戶提供了用細胞周期染料，針對細胞表面標記物的抗體和熒光蛋白進行多重分析的機會。在 XdU 摻入后，點擊反應和隨后的洗滌步驟可以在60分鐘內完成，并且新生 DNA 可以使用標準成像系統或流式細胞儀進行定量。還提供環境的無銅 BucculiteTM FdU 細胞增殖測定綠色，紅色和深紅色熒光。這些試劑盒利用我們的 BuccutteTM 標記化學，以促進檢測新合成的 DNA 在活躍增殖的細胞。
用 Bucculite XdU 細胞增殖試驗檢測 IL 細胞增殖。使用 Bucculite XdU 細胞增殖 iFluor 488成像試劑盒(22326)和 Bucculite XdU 細胞增殖 iFluor 647成像試劑盒(22328)中提供的試劑和固定/檢測方案處理 HeLa 細胞。兩個樣本均用 Hoechst 33342核酸染色(17530)進行復染，并用熒光顯微鏡成像。
|
產品名稱
|
規格
|
貨號
|
|
Bucculite XdU細胞增殖熒光成像試劑盒“紅色熒光”
|
200Tests
|
22327
|
|
Bucculite XdU細胞增殖熒光成像試劑盒“綠色熒光”
|
200Tests
|
22326
|
|
Bucculite XdU細胞增殖熒光成像試劑盒“深紅色熒光”
|
200Tests
|
22328
|
|
Bucculite XdU細胞增殖檢測試劑盒“紅色熒光兼容”“流式細胞術”
|
100Tests
|
22325
|
|
Bucculite XdU細胞增殖檢測試劑盒“藍色激光兼容”“流式細胞術”
|
100Tests
|
22323
|
|
Bucculite FdU細胞增殖熒光成像試劑盒“紅色熒光”“無銅”
|
200Tests
|
22315
|
|
Bucculite FdU細胞增殖熒光成像試劑盒“綠色熒光”“無銅”
|
200Tests
|
22305
|
|
Bucculite FdU細胞增殖熒光成像試劑盒“深紅色熒光”“無銅”
|
200Tests
|
22320
|
|
BrUTP*10mM溶于TE Buffer*細胞增殖檢測
|
100ul
|
17032
|
|
BrdUTP*10mM溶于TE Buffer*細胞增殖檢測
|
100ul
|
17031
|
表1.可用于流式細胞術和增殖實驗的產品