D-熒光素是流行的多功能生物發光底物。螢火蟲熒光素酶/熒光素生物發光系統存在于螢火蟲（Photinus pyralis）和其他幾種甲蟲中。熒光素酶通過二氧雜環丁酮中間體氧化ATP進行活化熒光素。這種ATP生物發光的主要應用是通過測試食品加工廠中的表面來確定質量，以確定是否存在設備或產品的污染。D-熒光素是美國AAT Bioquest 的產品。百螢生物為您提供的D-熒光素系列產品。

實驗方案

操作方法 

以下方案是鉀鹽和鈉鹽制備的一個例子，它可以適用于大多數細胞類型和體內動物用途。

1.用于體外生物發光圖像測定的實施方案

1.1在無菌水中制備100mM（100-200X）熒光素原液，混合均勻。隨配隨用，或使用等分試樣，其他等分儲存在-20°C，避免凍融循環，避免暴露在光線下。

1.2在預熱的組織培養基中制備0.5-1mM D-熒光素的工作溶液。

1.3從培養的細胞中分離培養基。

1.4將熒光素工作溶液加入細胞中，并在成像前將細胞在37°C孵育5-10分鐘。

2.用于體內生物發光圖像測定的實施方案

2.1在DPBS中制備15mg / mL熒光素儲備溶液，不含Mg2+和Ca2+。 混合均勻。

2.2通過0.2μm過濾器過濾溶液。隨配隨用或單獨使用等分試樣，其余等分儲存在-20°C，避免凍融循環，避免暴露在光線下。

2.3在動物體重150mg / kg（或10μL/ g熒光素儲備溶液）成像前10-15分鐘在腹膜內（i.p.）注射熒光素。

注意：應對每種動物模型進行熒光素的動力學研究，以確定峰值信號時間。

3.熒光素報告分析分子測定的實施方案

3.1在無菌水中制備100mM熒光素儲備溶液。 隨配隨用或單獨使用等分試樣，其余等分儲存在-20°C，避免凍融循環，避免暴露在光線下。

3.2制備1mM D-熒光素的工作溶液，其中含有3mM ATP，1mM DTT和15mM MgSO4的25mM tricine緩沖液，pH7.8。

3.3將5-10μl細胞裂解液移入微孔板中。使用不含裂解液的裂解試劑或緩沖液作為空白對照。

3.4根據制造商的說明，使用熒光素工作溶液的普利光度計。

3.5注入200μl熒光素工作溶液。 

注意1：D-熒光素鉀鹽溶于無菌水和緩沖液，溶解度可高達25mg/mL。一般使用濃度為3-15 mg/mL。溶液的pH值、溶液中的氧氣和保存時間對其保存過程中的穩定性非常重要。當溶液的pH<6.5（發生水解作用）或>7.5（發生消旋化作用，D型轉化為L型）的情況下，D-熒光素鉀鹽相對不穩定。如果溶液中存在少量的氧氣，將加速D-熒光素鉀的降解速度。儲備溶液可以在不含ATP的水中制備，并在-20°C下避光儲存。必須用適當的堿中和游離酸溶解。

注意2：D-熒光素可與任何現有的文獻或ATP分析系統一起使用。

注意3：如果檢測ATP，請戴上手套并使用無ATP容器，盡量減少所有可能的ATP污染源。僅使用無菌無ATP水和試劑。使用高壓水進行所有試劑制備。