D蟲熒光素鉀鹽是螢火蟲熒光素酶底物,其量子效率為0.88,是Luminol的20倍。反應原理:首先,在鎂離子存在下熒光素酶使熒光素與ATP反應,接著它被氧化形成二氧雜環丁烷結構并發出黃綠色的光。Luciferin-luciferase發光用于ATP監控以測定細胞活力以及**計數。它還用于報告基因檢測。可與小動物活體成像系統配套使用,用于標記LUC基因后的體內活體熒光檢測。
D蟲熒光素鉀鹽使用方法:
1. 活體成像分析方法
(1) 用DPBS(w/o Mg2+、Ca2+)配置D-Luciferin工作液(15mg/mL)* ,0.2 μm濾膜無菌過濾。
(2) 注射量:10μL/g的體重,如10g 重小鼠,注射100μL 工作液(1.5 mg D-Luciferin)。
(3) 腹腔注射10~15分鐘后,上機進行圖像分析。
2. 體外分析方法
(1) 用無菌水配置200× 的D-Luciferin儲備液(30mg/mL)*,立即使用,或-20℃保存。
(2) 用預熱好的完全培養基1∶200稀釋D-Luciferin儲備液,配置工作液(150μg/mL)。
(3) 去除培養細胞的培養基。
(4) 進行圖像分析前,向細胞中添加1× 的D-Luciferin工作液,進行圖像分析**。
* :溶解D-Luciferin時要完全。
**:在圖像分析前,將細胞進行37℃的短時間培養可以增加信號強度。
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