鬼筆環肽是鬼筆**家族的主要代表，是一種雙環七肽，是從有毒的死亡帽蘑菇傘形毒蕈中分離出來的。它對F-肌動蛋白亞基之間的凹槽具有很高的親和力。一旦與F-肌動蛋白結合，鬼筆環肽就會使單體和長絲的平衡向長絲位置移動，并抑制ATP水解。相互作用通過防止亞基解離來穩定肌動蛋白絲，并通過降低臨界濃度促進肌動蛋白聚合。結果，這些特性使得鬼筆環肽衍生物成為可視化F-肌動蛋白和細胞骨架網絡的有用染色劑。本周百螢主要想帶大家了解一下關于鬼筆環肽、肌動蛋白以及染色過程中經常遇到的問題。

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1.我可以用戊二醛固定細胞，然后用熒光鬼筆環肽染色嗎？ 可以使用戊二醛固定細胞。請根據實驗條件選擇固定方法。用甲醛、多聚甲醛或戊二醛固定細胞后，用鬼筆環肽綴合物（例如鬼筆環肽-iFluor 488）染色效果較佳。 圖示:用鬼筆環肽-iFluor 綴合物標記的肌動蛋白絲。F-肌動蛋白，細胞核和溶酶體分別用（A）Phalloidin iFluor 488（#23115），Nuclear blue DCS1（#17548）和LysoBrite Red（#22645）染色，（B） Phalloidin-iFluor 700（#23129）和Nuclear Blue DCS1（C）Phalloidin-iFluor 350（#23110）和Nuclear Orange DCS1（#17551）。

2.在用鬼筆環肽染料綴合物對肌動蛋白染色之前，應如何固定樣品？ 避免使用含甲醇的固定劑，因為它會在固定過程中會破壞肌動蛋白。優選的固定劑是不含甲醇的甲醛。

3.在用鬼筆環肽-iFluor 綴合物對F-肌動蛋白染色之前，我需要對石蠟包埋的組織切片進行脫石蠟處理嗎？您可以提供脫石蠟方案嗎？ 是的，使用任何熒光鬼筆環肽綴合物對F-肌動蛋白染色，都必須將石蠟包埋的組織切片去石蠟（去除石蠟）。 去除組織切片的石蠟：  將切片加熱到57°C持續5分鐘。 將切片浸入2次二甲苯中，每次5分鐘。 將切片分別浸入100％，95％和70％的乙醇中，每次5分鐘。 用1X PBS洗滌2次，每次5分鐘。 進行F-肌動蛋白標記。

4.甲醛和多聚甲醛在細胞固定方面有什么區別？ 多聚甲醛（PFA） 是甲醛的聚合物。多聚甲醛本身不是固定劑，需要溶解成甲醛?？梢酝ㄟ^加熱或在堿性條件下溶解得到甲醛。 福爾馬林 是飽和（37％）甲醛溶液的名稱。但是請注意，某些商業甲醛溶液中含有甲醇以防止聚合（轉化為多聚甲醛）。由于100％福爾馬林含有高達15％的甲醇作為穩定劑，因此對細胞固定有很大影響。 甲醇是一種滲透劑。它可以干擾膜結合蛋白的染色，并且可以極大地影響細胞骨架蛋白的染色。例如，當染色細胞F-肌動蛋白時，必須使用不含甲醇的甲醛固定劑。這是因為甲醇可以在固定過程中破壞F-肌動蛋白并阻止鬼筆環肽綴合物的結合。

5.鬼筆環肽對細胞滲透嗎？ 鬼筆環肽不是細胞可滲透的，因此不能在活細胞上使用。熒光標記的鬼筆環肽，例如Phalloidin-iFluor 488綴合物，只能在甲醛固定和透化的組織切片、細胞培養和無細胞實驗中用于對F-肌動蛋白染色。更多詳情

6.鬼筆環肽-iFluor綴合物推薦 貨號 產品名稱 規格 價格 23115 鬼筆環肽-iFluor 488標記 300Tests 1740 23116 鬼筆環肽-iFluor 514標記 300Tests 1740 23117 鬼筆環肽-iFluor 532標記 300Tests 1740 23119 鬼筆環肽-iFluor 555標記 300Tests 1740 23122 鬼筆環肽-iFluor 594標記 300Tests 1740 23125 鬼筆環肽-iFluor 633標記 300Tests 1740 23127 鬼筆環肽-iFluor 647標記 300Tests 1740 23128 鬼筆環肽-iFluor 680標記 300Tests 3540 23129 鬼筆環肽-iFluor 700標記 300Tests 3540 23130 鬼筆環肽-iFluor 750標記 300Tests 3540 23131 鬼筆環肽-iFluor 790標記 300Tests 3540 23150 鬼筆環肽-AF350標記（升級版：鬼筆環肽-iFluor 350標記) 300Tests 3540 23153 鬼筆環肽-AF488標記（升級版：鬼筆環肽-iFluor 488標記） 300Tests 3540 23158 鬼筆環肽-AF594標記（升級版：鬼筆環肽-iFluor 594標記） 300Tests 3540 圖示：A）用鬼筆環肽-iFluor 488染色（#23115）染色的HeLa細胞的熒光圖像，并使用配備FITC濾光片的熒光顯微鏡觀察。將細胞固定在4％甲醛中，并與線粒體染料MitoLite Red FX600（#22677）和Nuclear Blue DCS1（#17548）染色；B）用鬼筆環肽-iFluor 514（#23116）染色的HeLa細胞的熒光圖像，并使用配備有TRITC濾光片組的熒光顯微鏡觀察。固定的細胞用Nuclear Blue DCS1（#17548）染色；C）用鬼筆環肽-iFluor 532（#23117）染色的HeLa細胞的熒光圖像，并使用配有TRITC濾光片組的熒光顯微鏡觀察。固定的細胞用Nuclear Green DCS1（#17550）染色；D）用鬼筆環肽-iFluor 647（#23127）染色的HeLa細胞的熒光圖像，并使用配備Cy5濾光片組的熒光顯微鏡觀察。首先用線粒體染料MitoLite Green（#22675）對活細胞進行染色。在4％甲醛中固定后，細胞用鬼筆環肽-iFluor 647標記，并用Nuclear Blue DCS1（藍色，#17548）染色。