Fluo-4 AM是Fluo-4的乙酰甲酯衍生物，是一種可以穿透細胞膜的熒光染料。Fluo-4 AM的熒光非常弱，其熒光不會隨鈣離子濃度升高而增強。Fluo-4 AM進入細胞后可以被細胞內的酯酶剪切形成Fluo-4，從而被滯留在細胞內。Fluo-4可以和鈣離子結合，結合鈣離子后可以產生較強的熒光，激發波長為494nm，發射波長為516nm。實際檢測時推薦使用的激發波長為488nm左右，發射波長為512-520nm。
1. Fluo-4 AM遇水極易分解，建議**次使用時，母液分裝并密封保存，同時注意保持干燥。
2. Fluo-4 AM在4℃、冰浴等較低溫度情況下會凝固而粘在離心管管底、管壁或管蓋內，可以20-25℃水浴溫育片刻至全部融解后使用。
3. 探針的工作濃度、細胞量、孵育溫度和時間等需要根據不同實驗預先摸索。
4. 熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。