基本信息
貨號：22656 (500 assays)
儲存條件：保存在冰箱并避光
適用儀器：熒光顯微鏡
簡介
溶酶體是細胞器，其含有酸水解酶以分解廢物和細胞碎片。 溶酶體消化多余的或破舊的細胞器，食物顆粒和吞噬的病毒或**。溶酶體周圍的膜允許消化酶在pH4.5下工作。 溶酶體的內部是與微堿性胞質溶膠（pH 7.2）相比，酸性（pH 4.5-4.8）。 溶酶體通過質子泵和氯離子通道從細胞質中泵送質子穿過膜來維持這種pH差異。
我們的Cell Navigator?熒光成像試劑盒是一套熒光成像工具，用于標記亞細胞器，如膜，溶酶體，線粒體，細胞核等。活細胞區的選擇性標記為研究空間和時間細胞事件提供了一種強大的方法。
該特定試劑盒設計用于在Ex / Em = 490 / 525nm處以綠色熒光標記活細胞的溶酶體。試劑盒中使用的專有溶解性染料可能通過溶酶體pH梯度選擇性地積聚在溶酶體中。溶致指示劑是一種疏水性化合物，易于滲透完整的活細胞，并在進入細胞后被捕獲在溶酶體中。進入溶酶體后，其熒光顯著增強。這一關鍵特征顯著降低了其染色背景，使其可用于多種研究，包括細胞粘附，趨化性，多藥耐藥性，細胞活力，細胞凋亡和細胞毒性。它適用于增殖和非增殖細胞，可用于懸浮細胞和貼壁細胞。
試劑盒成分
樣品分析
簡要總結
準備細胞®
添加染料工作溶液®
在37°C孵育30分鐘至2小時®
在熒光顯微鏡下在Ex / Em = 490/525 nm（FITC濾光片組）下進行分析
操作步驟
1.準備溶酶體染色溶液：
1.1將LysoBrite?綠色（組分A）溫熱至室溫。
1.2通過將20μLLysoBrite?Green（組分A）稀釋到10 mL活細胞染色緩沖液（組分B）中來制備染料工作溶液。
注1：對于一個96孔板，20μL的LysoBrite?Green（組分A）就足夠了。 將未使用的LysoBrite?Green（組分A）等分并儲存在<-20 oC。 避光，避免反復凍融循環。
注2：熒光溶酶體指示劑的濃度根據具體應用而變化。 可以根據特定細胞類型和細胞或組織對探針的滲透性來修改染色條件。
2.準備和染色細胞：
2.1對于貼壁細胞：在96孔黑色壁/透明底板（100μL/孔/ 96孔板）中或在裝有適當培養基的培養皿內的蓋玻片上培養細胞。當細胞達到所需的匯合時，加入等體積（如100μL/孔/ 96孔板）的染料加工溶液（來自步驟1.2）。 將細胞在37℃，5％CO 2培養箱中孵育30分鐘至2小時。 使用配有FITC過濾器組的熒光顯微鏡觀察細胞。
注意：如果細胞看起來沒有充分染色，建議增加標記濃度或孵育時間以使染料積累。
2.2對于懸浮細胞：將細胞以1000rpm離心5分鐘以獲得細胞沉淀并吸出上清液。 在預熱的生長培養基中輕輕重懸細胞沉淀，然后加入等體積的染料加工溶液（來自步驟1.2）。 將細胞在37°C，5％CO2培養箱中孵育30分鐘至2小時。 使用配有FITC過濾器組的熒光顯微鏡觀察細胞。
注1：如果細胞看起來沒有充分染色，建議增加標記濃度或孵育時間以使染料積累。
注2：懸浮細胞可以附著在用BD Cell-Tak®（BD Biosciences）處理過的蓋玻片上，并作為貼壁細胞染色（見步驟2.1）。
圖1.使用Cell Navigator?溶酶體染色試劑盒染色的U2OS細胞圖像* Costar黑色96孔板中的綠色熒光*
參考文獻
1. Hung, H; Deerinck, TJ; Ellisman, MH; and Spector, DL. (1994) In vivo analysis of the stability and transport of nuclear poly(A)+ RNA. J Cell Biol 126, 877-899.
2. Barasch J, Kiss B, Prince A, Saiman L, Gruenert D, al-Awqati Q. (1991) Defective acidification of intracellular organelles in cystic fibrosis. Nature 1991; 352:70-73.
3. Jiang, LW; Maher,VM; McCormick, JJ and Schindler, M. (1990) Alkalinization of the lysosomes is correlated with ras transformation of murine and human fibroblasts. J Biol Chem 265, 4775-4777.
4. Griffiths, G; Hoflack, B; Simons, K; Mellman, I; Kornfeld, S. (1988) The mannose 6-phosphate receptor and the biogenesis of lysosomes. Cell. 12;52(3):329–341.