基本信息

貨號：22200（5mg）

儲存條件：-20℃避光防潮

簡介

JC-1廣泛用于通過流式細胞術確定線粒體膜電位。它能夠選擇性地進入線粒體，并且隨著線粒體膜電位的增加（超過約80-100mV的值）可逆地將其顏色從綠色變為橙色。這種性質是由于線粒體膜極化后JC-1聚集體的可逆形成導致發射光從530nm（即JC-1單體形式的發射）轉變為590nm（即J-聚集形式的發射） 。當在490 nm處激發時，隨著線粒體膜變得更多，JC-1的顏色從綠色到橙色可逆地變化偏振。使用通常安裝在所有流式細胞儀中的過濾器可以檢測兩種顏色。可以在熒光通道1（FL1）和通道2（FL2）中的綠橙發射中分析綠色發射。使用JC-1的主要優點是它可以提供定性信息，考慮到從綠色到橙色熒光發射的轉變，以及定量信息，考慮到純熒光強度，可以在FL1和FL2通道中檢測到。除了廣泛用于流式細胞儀外，JC-1還用于熒光成像。我們已經開發出一種在熒光微孔板平臺中使用它的方案。盡管JC-1在許多實驗室中被廣泛使用，但其水溶性差使得它在某些應用中難以使用。我們的JC-10具有比JC-1更好的水溶性，并且JC-10在一些細胞系中甚至具有優于JC-1的性能。

物理化學特性

分子量：652.23

儲存方式：DMSO

Ex=515nm

Em=529nm和590nm

JC-1染色細胞分析

簡要概括

使用測試化合物制備細胞®

添加JC-1工作溶液（96孔板100μL/孔或384孔板25μL/孔）®

室溫或37 ℃孵育1小時®

移除JC-1工作 解決方案®

讀取Ex / Em = 490/525 nm和490/590 nm處的熒光強度

注意：以下是我們推薦的活細胞方案。 該協議僅提供指南，應根據您的特定需求進行修改。

操作步驟

1.準備JC-1工作解決方案：

1.1在高質量無水DMSO中制備2至10 mM JC-1的儲備液。 應及時使用原液; 任何剩余的溶液應等分并在<-20℃冷凍。

注意：避免反復凍融循環，避免光照。

1.2制備1X JC-1工作溶液：在實驗當天，將JC-1固體溶解在DMSO中或將等份的JC-1儲備溶液解凍至室溫。 在Hanks和20 mM Hepes緩沖液（HHBS）或您選擇的緩沖液（pH 7）和0.02％Pluronic®F-127中制備10至30μM1XJC-1工作溶液。 通過votexing很好地混合它們。

注意：JC-1不溶于水，因此它打算在溶液中聚集。 建議在將JC-1工作溶液加載到池中之前對其進行過濾。

2.用熒光酶標儀進行JC-1檢測：

2.1用測試化合物處理細胞一段所需的時間（例如，Jurkat細胞可以用喜樹堿處理4-6小時）以誘導細胞凋亡。 對于空白孔（沒有細胞的培養基），加入相應量的化合物緩沖液。

2.2將100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板的JC-1工作溶液（來自步驟1.2）加入細胞板中。

2.3將JC-1加載板在37℃，5％CO2培養箱中孵育15-60分鐘。

注意：適當的孵育時間取決于所使用的單個細胞類型和細胞濃度。優化每個實驗的孵育時間。

2.4從平板上取下JC-1工作溶液，用HHBS或您選擇的緩沖液清洗細胞。 將100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔HHBS板加回到細胞板中。

2.5監測Ex / Em = 490/525 nm和490/590 nm處的熒光變化，進行比率分析。

3.用熒光顯微鏡或流式細胞儀進行JC-1測定：

3.1用測試化合物處理細胞一段所需的時間（例如，Jurkat細胞可以用喜樹堿處理4-6小時）以誘導細胞凋亡。

3.2離心細胞，每管取1-5×105個細胞。

3.3將細胞重懸于500μLJC-1工作溶液中（來自步驟1.2）。

3.4在室溫或37°C孵育10至30分鐘，避光。

3.5用您選擇的HHBS或緩沖液清洗細胞。 將細胞重懸于500μLHHBS中以獲得每管1-5×10 5個細胞。

3.6使用熒光顯微鏡（使用FITC和TRITC濾光片）或流式細胞儀（使用FL1和FL2通道）監測Ex / Em = 490/525 nm和490/590 nm處的熒光變化。