基本信息

貨號：21411（25mg）

儲存條件：-20℃避光防潮

簡介

DiBAC4（3），DiBAC4（5）和DiSBAC2（3）是一組靈敏的慢響應膜電位探針，廣泛用于測量許多生物系統的膜電位。 通常，慢反應探針在其跨膜分布中表現出潛在的依賴性變化，伴隨著大的熒光變化。 它們的光學響應的幅度遠大于快速響應探針的幅度（通常每mV的熒光變化為1％）。 包括陽離子羰花青，羅丹明和陰離子氧雜菁的慢反應探針適用于檢測由呼吸活性，離子通道滲透性，**結合和其他因素引起的非興奮細胞的平均膜電位的變化。

物理化學特性

分子量：516.64

儲存方式：DMSO

Ex=493nm

Em=516nm

染色細胞分析方案

簡要概括

在生長培養基中制備細胞®

添加染料加載溶液（96孔板100μL/孔或384孔板25μL/孔）®

在室溫或37 oC孵育30分鐘至1小時®

讀取熒光強度

在Ex / Em = 490 / 525nm（Cat。＃21411），590 / 632nm（Cat。＃21410）或540/590nm（Cat。＃21414）

注意：以下是我們推薦的活細胞方案。 它只提供指導，應根據您的具體需求進行修改。

操作步驟

1.準備細胞：

1.1對于貼壁細胞：在生長培養基中以40,000至80,000個細胞/孔/100μL將細胞過夜用于96孔板或10,000至20,000個細胞/孔/25μL用于384孔板。

1.2對于非粘附細胞：從培養基中離心細胞，然后將細胞沉淀懸浮于等量的HHBS和MP染料加載溶液中（參見下面的步驟2.2），125,000至250,000細胞/孔/100μL，96- 對于384孔聚D賴氨酸板，聚d-D賴氨酸板或30,000至60,000細胞/孔/25μL。在實驗之前以制動器關閉以800rpm離心板2分鐘。

注意：應對每個細胞系進行單獨評估，以確定細胞內鈣動員的細胞密度。

2.準備DiSBAC2（3）染料加載溶液（1個板）：

2.1在高質量無水DMSO中制備10至30 mM的DiSBAC2（3）儲備液。 應及時使用原液; 需要將任何剩余的溶液等分并在<-20℃冷凍。

注意：避免反復凍融循環，避免光照。

2.2制備2X DiSBAC2（3）染料加載溶液：在實驗當天，將DiSBAC2（3）固體溶解在DMSO中或將等份的DiSBAC2（3）儲備溶液解凍至室溫。制備2X工作溶液 在Hanks和20mM Hepes緩沖液（HHBS）或您選擇的緩沖液中，20至40μM，pH值為7，含有0.04％至0.08％Pluronic®F-127（Cat。＃20053）和2 mM Trypan Red Plus?（Cat。 ＃2456）。 通過votexing很好地混合它們。 該工作溶液在室溫下穩定至少2小時。

3.運行膜電位測定：

3.1將100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）DiSBAC2（3）染料加載溶液（來自步驟2.2）加入細胞板中。

注意1：如果您的篩選化合物干擾生長培養基和血清因子，在添加DiSBAC2（3）染料加載溶液之前，用等體積的HHBS緩沖液替換生長培養基。或者，細胞可以在無血清條件下生長。

注2：染料加載后不要洗滌細胞。

3.2將染料加載板在細胞培養箱中孵育30至60分鐘。

注意：在某些情況下，在室溫下孵育30至60分鐘可能會更好。

3.3使用HHBS或所需緩沖液制備復合板。

3.4通過監測Ex / Em = 540 / 590nm處的熒光強度（Cat。＃21414）進行膜電位測定。

注意：在實驗之前運行信號測試很重要。不同的樂器有自己的強度范圍。將信號測試強度調整到儀器強度計數的10％至15％的水平。例如，FLIPR-384的*大熒光強度計數為65,000，因此應調整儀器設置以使其信號測試強度在7,000到10,000左右。

數據分析

圖1.在WSS-1細胞中用DiSBAC2（3）測量GABA劑量反應。 將WSS-1細胞以50,000個細胞/100μL/孔接種過夜，置于96孔黑色壁/透明底板中。 將細胞與100μLDiSBAC2（3）染料上樣溶液在室溫下孵育30分鐘。 通過FlexStation（Molecular Devices）添加GABA（50μL/孔）以達到*終指示的濃度。