今天，百螢為大家帶來的是用于細胞和組織中低豐度靶標的高分辨率成像技術。TSA/PSA是一種成熟的細胞信號放大技術，當TSA/PSA與我們光穩定性、水溶性**的iFluor染料結合后，產生的熒光信號具有比傳統**組織化學、**細胞化學和**熒光方法產生的信號更高的**度和靈敏度。PSA是美國AAT Bioquest自主研發的與TSA功能類似的信號放大方法，其熒光信號強度比廣泛使用的tyramide（TSA）試劑高10-50倍。感興趣的朋友一起來看看吧！
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TSA/PSA原理
酪胺信號放大（TSA）是一種基于辣根過氧化酶（HRP）的催化活性對靶蛋白或核酸進行高密度原位標記的酶學檢測方法。原理為酪胺Tyramide的過氧化物酶反應（已標記熒光的酪胺在HRP催化H?O?下形成共價鍵結合位點）產生的大量酶促產物與目標蛋白的酪氨酸殘基共價結合，從而使目標蛋白標記上特異的熒光或生物素。
圖1.TSA/PSA原理及工作流程圖。通過類似于傳統ICC和IHC方法的工作流程，TSA/PSA試劑可以通過幾個簡單的步驟實現對所需目標的靈敏檢測。
表1.TSA/PSA技術與傳統**熒光對比
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TSA/PSA多標**熒光
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傳統**熒光
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靶點數目
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不受限制（*多可同時染色7-10種）
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一般標記3種（含DAPI）,>3種標記難度較大
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一抗種類
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同一種屬的不同抗體即可滿足要求
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不同種屬的不同抗體
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二抗種類
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連接辣根過氧化物酶的同種屬二抗
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連接熒光探針的不同種屬二抗
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染色策略
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任何樣本無需任何染色策略，簡單的重復前一步的染色過程，樣本/靶點的差異不影響染色過程，使用簡單方便
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樣本抗原的空間位置的差異，需要設計復雜的染色策略。樣本/靶點的差異導致染色策略的差異，染色過程復雜、多變
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染色效果
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高染色分辨率和染色特異性，信號強度更強,更穩定,淬滅時間更長，無背景影響，各靶點的信噪比大大提高，尤其適合組織基于單細胞的定量分析
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亮度較弱,容易淬滅,各種抗體間存在互相影響，背景較高，對基于單細胞的定量分析不利。
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實驗成本
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同一種屬的一抗和二抗，價格相對便宜。
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簡單的染色策略和無需任何重復的預實驗，即可掌握整個染色技術，大大縮小了預實驗的材料損耗。
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一抗和二抗工作濃度更低,單次費用更低
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-
不同種屬的抗體價格存在差異，一般種屬**的價格高。
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不同種屬的二抗，價格存在差異，一般**的種屬價格高。
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尋找合適的染色策略，復雜的多次重復的預實驗大大的增加了實驗成本
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應用范圍
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二抗具備通用性，因此實驗室中所有的研究領域均可使用
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二抗不具備通用性，實驗室中應用領域受到局限
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TSA/PSA特點
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TSA
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PSA
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1.適用廣，多色標記
2.多重標記可避免抗體種屬交叉問題
3.染色特異性好，信號強度高，適合低豐度靶標
4.石蠟切片樣本熒光染色背景干凈
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1.檢測靈敏度提高了100多倍，比標準IHC，ICC，IF方法高出100倍
2.改進的熒光信號比酪胺（TSA）試劑高10至50倍
3.PSA 自由基的更高反應性允許在HRP-靶相互作用位點更快速，有效和更穩定地標記Styramide綴合物。
4.在不犧牲靈敏度的情況下，PSA可以使用更少量的抗體/探針
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實驗結果展示
圖2.分別用iFluor 488 PSA和Alexa Fluor 488 TSA染色甲醛固定的石蠟包埋人肺腺癌陽性組織的染色結果圖。人肺腺癌陽性組織切片用兔抗EpCam抗體染色，然后用polyHRP標記的山羊抗兔IgG二抗孵育，*后使用iFluor 488 PSA （Cat#45020）和Alexa Fluor 488 TSA分別染色。圖像顯示iFluor 488 PSA與Alexa Fluor 488 TSA相比提高了熒光IHC的靈敏度。
圖3.分別用iFluor 488 酪胺和Alexa Fluor 488 酪胺染色甲醛固定的石蠟包埋人肺腺癌陽性組織的染色結果圖。人肺腺癌陽性組織切片用兔抗EpCam抗體染色，然后用HRP標記的山羊抗兔IgG二抗孵育。顯影：iFluor 488 酪胺（左）；Alexa Fluor 488 酪胺（右）。核染色：DAPI
圖4.Styramide 超級信號放大試劑盒的信號強度對比。 （A）將HeLa細胞固定，透化并用各種濃度的兔抗微管蛋白一抗標記，建議的稀釋濃度為：1：500。 然后將細胞直接與AlexaFluor488綴合的山羊抗兔IgG二抗染色，*后分別與HRP標記的山羊抗兔IgG二抗、AlexaFluor 488酪胺和iFluor 488 Styramide（#45205）染色。 使用FITC濾光片組拍攝熒光圖像，并以相同的曝光時間進行分析。 （B）測量相對熒光信號強度，并比較不同檢測方法之間的強度。
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分類
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貨號
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產品名稱
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Ex(nm)
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Em(nm)
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TSA試劑
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試劑盒
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iFluor 555 Styramide超級信號放大成像試劑盒，含羊抗兔IgG
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