Cat#22844
Cell Meter?TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒
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訂購信息
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儲存條件
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儀器平臺
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產品編號：22844（50種分析）
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保存在冰箱中并避免光照
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熒光顯微鏡，流式細胞儀和熒光酶標儀
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產品介紹：
DNA片段化代表晚期細胞凋亡的特征。細胞凋亡中的DNA片段化可通過末端脫氧核苷酸轉移酶（TdT）介導的dUTP缺口末端標記（TUNEL）檢測細胞。TUNEL試驗依賴于DNA中缺口的存在，這可以通過TdT鑒定，TdT是一種酶催化添加用標記二次標記的dUTP。所有現有的TUNEL分析都包含高毒性的二甲胂酸鈉，它可能誘導細胞凋亡，還可以減少DNA的產生和DNA鏈。我們的Cell Meter?TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒使用不含二甲胂酸鈉的專有緩沖系統。該試劑盒基于Tunnelyte?Green的摻入，綠色熒光染料改性的脫氧尿苷5' - 在凋亡過程中形成的DNA片段的3'OH末端的三磷酸。該試驗針對該試驗進行了優化在不使用抗體的情況下直接檢測分離的或附著的細胞中的細胞凋亡。該試劑盒提供所有必需組件和優化的分析方案。它適合熒光酶標儀，熒光顯微鏡或流式細胞儀?？梢允褂肍ITC檢測其信號濾光片組或Ex / Em = 490nm / 520nm。
試劑盒套件：
分析方案：
簡要概述
1、用測試化合物制備細胞®
2、用4％甲醛固定細胞®
3、用反應混合物培養
4、在37°C下培養1小時®
5、在Ex / Em = 490/520 nm處洗滌并分析細胞
操作步驟
1.根據您的特定方案將細胞培養至*佳密度以誘導細胞凋亡。 我們對于在96孔微孔板培養物中生長的粘附細胞，推薦約30,000至50,000個細胞/孔約1至2 x 106非粘附細胞的細胞/ mL。同時，對于每種標記條件，用與誘導群體相同的密度培養非誘導的陰性對照細胞群。注意：我們用100nM-1μM星形孢菌素處理HeLa細胞4小時以誘導細胞凋亡。
2.固定和透化
A,去除細胞培養基。
B,向每個孔中加入100μL/孔/ 96孔板的4％甲醛固定緩沖液（未提供）。
注意：對于非貼壁細胞，添加所需的量（例如2 x 106細胞/ mL）4％甲醛固定劑緩沖
C,在室溫下培養平板20至30分鐘。
D,去除固定劑。
可選：如果需要，在固定后加入100μL/孔/ 96孔板的透化試劑（0.2％Triton X-100在PBS中，未提供），并在室溫下培養10分鐘即 用PBS洗滌細胞2-3次。
可選：您也可以通過消化細胞使用DNAase I制備TUNEL反應的陽性對照，用DNA酶I在室溫下保持30分鐘，然后進行TUNEL反應（步驟3）
3. TUNEL反應
A,在使用前根據待測樣品的數量準備反應混合物：
注意：應對每個細胞系進行單獨評估，以確定*佳細胞密度。
B，向每個樣品中加入50μL反應混合物（來自步驟3.1），并在37℃下培養60分鐘。
C，除去反應混合物，用200μL/孔的PBS洗滌細胞3-5次。
4.通過熒光顯微鏡，流式細胞儀或熒光微孔板監測熒光強度，讀數在Ex / Em = 490/520 nm。
5.可選：用1X Hoechst（組分C，Ex / Em = 350 / 460nm）染色細胞核用于圖像分析。
數據分析：
