Cat#15204
DCFH-DA 活性氧ROS熒光探針
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訂購信息
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存儲條件
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貨號： 15204 (25 mg)
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保持在-20°C并干燥
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物理化學特性
分子量：487.29
溶劑：DMSO
光譜特性：激發=504，發射=529
生物應用
2'，7'-二氯二氫熒光素二乙酸酯（也稱為2'，7'-二氯熒光素二乙酸酯）被細胞酯酶水解成2'，7'-二氯二氫熒光素（也稱為2'，7'-二氯熒光素），然后被氧化成2。 '，7'-二氯熒光素主要由H2O2組成。 2'，7'-二氯二氫熒光素二乙酸酯可能在細胞內氧化劑應激期間對廣泛的氧化反應具有反應性。 該探針廣泛用于監測細胞氧化還原過程。
染色細胞的樣本方案
以下過程提供了一般準則，請根據您的特定應用進行修改
1. 制備1-10mM DMSO儲備溶液。應將未使用的DMSO儲備溶液等分到單次使用的小瓶中避光并儲存在-20°C。
2. 在生理緩沖液（如PBS，HBSS，HEPES）中使染料的工作濃度為1-10μM。根據經驗確定工作濃度。
3. 從生長培養基中取出細胞，將染料工作溶液（來自步驟2）添加到細胞中，并在室溫或37 ℃下培養細胞5到60分鐘。
4. 去除染料工作溶液; 用預熱的HBSS洗滌，加入預熱的HBSS或生長培養基，在適宜溫度下培養。 恢復時間可以廣泛變化，因為一些細胞類型通常表現出低水平的酯酶活性。
5. 在將細胞暴露于實驗誘導物之前，確定負載細胞樣品的基線熒光強度。
6. 陰性對照如下：
6.1檢查未染色的細胞在綠色發射范圍內的自發熒光。
6.2對于流式細胞術，確定在染料加載和處理后細胞的正向和側向散射不變。細胞尺寸的變化可能與處理或毒性反應引起的起泡或收縮有關。
6.3在沒有誘導劑的情況下檢查染料和緩沖液/培養基的無細胞混合物的熒光。在沒有細胞外酯酶和其他氧化酶的情況下，熒光隨時間的逐漸增加可能與自發水解，大氣氧化或光誘導的氧化。
6.4檢查已經保持在生長培養基或簡單緩沖液中的未處理（對照）負載細胞的熒光。在健康細胞中，氧自由基被細胞酶或天然抗氧化劑消除。在染料加載恢復期后，健康細胞應表現出低水平的熒光，在實驗期間相對穩定; 然而，可以觀察到熒光逐漸增加（由于自動氧化）或減少（由于細胞中的染料損失或光漂白）。 在沒有任何刺激或誘導的情況下，健康的未經處理的細胞中的熒光突發可以指示細胞死亡或一些其他氧化事件的進展。
7.可以用H 2 O 2或叔丁基過氧化氫（TBHP）刺激陽性對照至終濃度~100μM（基于細胞的敏感性和反應增加或減少劑量）。
參考文獻
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