DiBAC4(3)是一種細胞膜電位敏感的親脂性陰離子熒光染料，DIBAC4(3)本身無熒光，當進人細胞與胞漿內的蛋白質結合后才發出熒光，DIBAC4(3)進入細胞，細胞內熒光強度增加，即膜電位增加表示細胞去極化；反之，細胞內熒光強度降低即膜電位降低表示細胞超極化。DiBAC4(3)是目前*常用的線粒體膜鈣離子熒光探針Fluo4
A. 取普通潔凈蓋玻片于70%乙醇中浸泡5分鐘或更長時間，無菌超凈臺內吹干或用細胞培養級PBS或0.9%NaCl等溶液洗滌三遍，再用細胞培養液洗滌一遍。將蓋玻片置于六孔板內，種入細胞培養過夜，使約為50%-80%滿。
B. 刺激細胞發生凋亡后，吸盡培養液，加入0.5ml固定液，固定10分鐘或更長時間（可4℃過夜）。
C. 去固定液，用PBS或0.9%NaCl洗兩遍，每次3分鐘，吸盡液體。洗滌時宜用搖床，或手動晃動數次。
D. 加入0.5ml Hoechst 33258染色液，染色5分鐘。也宜用搖床，或手動晃動數次。
E. 用PBS或0.9%NaCl洗兩遍，每次3分鐘。
F. 滴一滴抗熒光淬滅封片液于載玻片上，蓋上貼有細胞的蓋玻片，盡量避免氣泡。使細胞接觸封片液，切勿弄反。
G. 熒光顯微鏡可檢測到呈藍色的細胞核。激發波長在350nm左右，發射波長在460nm左右。
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